到底肺癌干细胞的筛选怎么进行下去啊

火云豹

我是做肺癌干细胞筛选的 老板是大牛人，太忙，没空指导我学习；实验经费多，不差钱。敬请有经验者指导导一下 我们实验室之前没有人做干细胞方面的课题  万事开头难，该如何入门请各位老师和同道指教
0 J$ f# h! z; B& F# t因为现在肺癌的marker不完全确定 国外做了发文说是CD133 可是有人重复试验没有得到类似结果 反而涌现出更多可疑marker
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0 Q9 U- u4 _4 x; Q8 d7 ?- M2 R大家知道 呼吸系统至少包含40种不同类型的细胞，同时肺癌干细胞的表面标志物也缺乏特异性，只能借助其他组织已知的肿瘤干细胞标记物进行对比观察。5 j1 P/ ^/ t# _- E

7 C6 L+ u: X. }' H7 k而肿瘤干细胞的甄选主要借助于细胞表面膜蛋白、黏附分子及受体等，主要集中于CD133 ,CD44、CD117和CD34等CD系列分子
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目前肺癌涉及到的相关可能marker有：CD133+. CD34+. CD24+. CD22+. ALDH1 . IGF-1R+ ; d7 M% T4 [/ z$ C  {% \6 J  Q
那么 肺癌的鳞癌 腺癌 大细胞癌 小细胞癌 是否真的有一个共同的祖宗_肺癌干细胞 或者 是否有可能同时存在好几种肺癌干细胞  毕竟 我们说肺癌是根据它的位置发生在肺部而言的 其组织来源是否完全相同呢/?

火云豹

还有 个人感觉光做肺癌的SP筛选时远远不够的 因为它是基于细胞膜表面的ABCG2基因的表达 但是看资料说正常的肺组织和癌旁组织也有表达 更何况 有可能某些干细胞根本不表达ABCG2 那么在用SP法的时候就漏掉了他们

饶冠华

回复 2# 火云豹 / `: T' P+ T9 y' }2 C$ E, ]& _
# A* o. D# q2 w. `6 I
我想知道你有多少种抗体？ 如果抗体多的话  其实很简单  你就养些sphere就行了  然后做个免疫荧光  看看哪些marker在 sphere中表达  而在非sphere的普通肿瘤细胞中不表达的  那就很有可能是cancer stem cell 的marker了  然后再继续做其它实验验证

火云豹

谢谢楼上的版主 我也是这么想 可是有些拿不准 细节应该很繁琐 一步错就步步错了 呵呵 我打算先在sphere中用免疫组化检验ABCG2的存在与否 在分选出来SP群 在此基础上再用抗体去结合检验 毕竟大部分文献还是认可SP法的 我也觉得这是一个集合 我再在其中找若干个子集  不只行否

饶冠华

呵呵 我不太看好sp法   都没有个标准  大部分时候都靠个人感觉吧 也许今天分出来的是这样的 明天分出来就可能是另一种

火云豹

谢谢绕版主 什么时候等你忙完了 还想听网上研讨会呢

smallboar

我刚涉及肺癌干细胞，请问楼主，你们的sphere是用什么方法培养的呢？我做的细胞系是A549和H460.( t- q, |, A3 K: C
请指教。

火云豹

无血清培养啊 DMEM-F12培养基 加生长因子

amosummer

你可以先把所有marker在癌组织和正常组织中做一个对比，real-time RT-PCR.观测有没有表达差异，找一些有差异的marker进行筛选，看是不是能够富集干细胞！

zmd0712323

只是DMEM加一些生长因子悬浮培养就可以了吗？具体是那些成分啊？万分着急 ！我养的肺癌细胞系总长不出球囊，只能看到很小的一团！怎么回事啊 ？
$ O: b! T7 s( Y/ H