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aoppolle

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金话筒优秀版主小小研究员

楼主

发表于 2009-12-10 10:48 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

我看文献说用有限稀释方法可以获得单个细胞。我不知道具体方法，还有就是这种方法可操作性怎么样，成功机会大吗，我导师怕我做不出来

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沙发

发表于 2009-12-10 10:58 |只看该作者

用流式细胞仪可以分选单个细胞啊

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火云豹

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优秀版主

藤椅

发表于 2009-12-10 11:17 |只看该作者

有限稀释法克隆培养:对数生长期的细胞贴壁生长铺满培养瓶后，pBS洗涤l次，0.5%Tripsin/0.04%EnTA胰酶消化，1000转、5分钟离心，弃上清，加培养液吹打成单细胞悬液，计数细胞约3.lxl06一4.6x106个/毫升，100微升单细胞悬液加900微升体积培养液倍比稀释至 3.1x100一 6x100个/毫升，100微升单细胞悬液加100微升体积培养液接种于968 _0 a7 l; Q: j. N8 l
孔培养板，于37℃、饱和湿度下5%COZ的培养箱中培养，24小时后吸去未贴壁细胞，标记单个细胞生长的培养孔，2一3周后细胞形成克隆，观察不同克隆形态和生长速度。转移到普通培养瓶扩大培养2一3周