干细胞标记的问题

yuheng

哦，是你没有把问题说清楚。3 z$ r; T4 Y# `5 f
体内DNA探针原位杂交来检测的话比较困难吧，干细胞不像其他的细胞那样不停增殖分裂，也没有特别好的特异性标识。
  j$ k0 o8 R6 w# S5 p( t3 [2 J我的想法是你可以将不同组织取出后匀浆消化，分离出单细胞，做流式检测。或者提总RNA，逆转为cDNA,然后找特异引物做realtime-PCR。当然找的点要和你想研究的干细胞类型有关了

lianshan87

回复 10# decloud2009 ' G. Y, D& Y; n# j% \' Z/ J  [

" F) B- M) k1 T& z7 \& d5 [8 j
; Z" R# E# C/ x! W. W9 G+ h2 |    那请问有什么更好的方法来找吗？

lianshan87

回复 11# yuheng 2 R# o  Y% U+ Y* ~8 q* s) e! w" a
0 K0 I: o9 ^' r

, T3 c7 {2 y4 S9 d( l    恩，谢谢，我最终的目的还是想弄清楚组织中干细胞的数目，如果做Realtime PCR那也得确定是干细胞特异性表达的基因才可以啊，但是目前好像没有这么特异性的基因，请问如果是生殖干细胞的话有没有公认的物种通用的特异性标记呢？我之前从来没有做过干细胞，我们实验室就没有做过细胞主要是做分子生物学的一些东西，现在老师让我做这个我觉得很棘手呀~~~

foxp3

你的课题好难！问一句，你的这个研究对象基因组序列还获得啦？如果有，倒是可以比对一下人的CD34、CD133等干性基因的同源性，看看是否在你的对象中是否有这些基因的表达进而确定是否可以用这些类似的标志去追踪可能的干细胞！

decloud2009

回复 12# lianshan87
. d# N9 S6 M% r% [# I6 s0 i& m# r; B4 s8 R. i0 E
4 Y+ Z; n4 M/ f) o3 |6 J3 e, ]
    这个好难得拉~~就我们自己提取组织干细胞，只要能传代，能在干细胞的培养基中存活下来，并且一些通用的mark检测阳性的话，就认为是干细胞拉~~~/ [. e" v  e4 k8 q. S

# W; c" i  J, E7 L其实我自己也表示很怀疑的。。。

lianshan87

回复 14# foxp3
1 p3 @9 N0 {7 `+ u1 O/ S& O# q0 }  P: N5 z

, d1 Q1 [& {$ Y( L+ J    唉，问题是没有啊，呜呜~~~

lianshan87

回复 15# decloud2009 0 t9 ~  P+ }1 q9 a

+ R+ v0 n4 g# P: [+ k; i9 \4 x" G8 t+ \
    对啊 所以我觉得没有建成的细胞系没准就因为组织中的干细胞很少呢，我也是非常头疼啊~~~

jiandong2001

利用原位杂交的手段利用干细胞特异性的探针做切片，从而可以显示出干细胞在组织中的位置，或者利用这一方法初步粗略估计该组织干细胞的数目~~~- B' k! Z9 p. O# H8 ]% d3 @% X
" R7 F* b5 {) L, _+ W
这个想法要是能在高等动物上实现就好了，是个不错的创意