如何将胚胎干细胞和支持他生长的饲养层分离开来？

starlight

我也是采用差速贴壁的方法，沉降时间可稍微长点吧，另外也可考虑用无饲养层条件培养

zpzp0312

挑取单个击落进行消化' c2 G: j4 y! Y+ z% g  t' u
单个集落的细胞数目足够满足实验需要

ssuwhite

学习下

mominglily

回复 12# zpzp0312
) r* s  N, j% e2 F0 \7 Z$ g4 v# k$ U/ W0 e- {1 V, N

. `! y: w7 e, c    请问怎么挑取单个集落啊？从来没试过勒，请教下！谢谢！

mominglily

回复 11# starlight 4 A3 O8 O, z9 p6 n5 U: e. o2 r/ J

$ Q) @. \$ h7 _$ _: u2 [& e嗯，也有考虑过用无饲养层培养的方法，但目前仍限于用有饲养层的培养方法。1 l8 n: u) I- l1 [' _' P8 |# m2 ^
还有就是延长沉降时间，具体需要延长多久呢，我担心沉降久了mES细胞也会贴壁了，那样的话将会损失不少干细胞呢！

mominglily

回复 10# 可怜的孩子
1 L8 u1 G7 u/ a$ i, r9 C$ r0 @# j' O: k
' L2 z9 `9 ]  ~$ S; D* t. \! h
    对，是丝裂霉素处理过后的MEF，且是已经支持mES细胞生长以后的MEF，在mES传代或冻存或者用mES细胞来做MTT试验需要对mES细胞计数埋板时，想把原来支持mES生长的feeder去除掉，这样埋板时的mES细胞就会比较纯粹一点。

ssuwhite

本人也是个菜鸟，但看到师兄做的可以用机械法分离。我看到的文献，是用胶原酶分离。

ssuwhite

sniper

我也正在做这一步实验，师兄说挑出细胞集落，消化成单个的细胞就可以用了

上海过客

小鼠的克隆团 太小 ，似乎 不如  人的 ES 那么大啊 。
$ U" T9 q* [  O" S
$ ~7 p) n$ ?0 O) M这个也比较麻烦 ，而且每次 总感觉能挑出 一些MEF 来 。比较麻烦