如何将胚胎干细胞和支持他生长的饲养层分离开来？

cortex

基本说的很全面了：1 差速贴壁，可取；2 无饲养层培养体系不错；3 磁珠分选也行；4 手工挑选也不错（具体方法：用巴斯德管自己拉针，在体式显微镜下对克隆进行挑选）。至于消化成单细胞，可以用胰酶消化，当然，也可以用dispase，它较之胰酶要柔和谢。自我感觉胶原酶消化的不怎么好，传代后细胞状态好像不怎么好，可能是个人原因吧。

tspaulzhao

Thanks.

ghfvcat

回复 31# cortex
- l. i+ v( d$ |! X8 Y* @( B. I1 P' z, B1 |6 M
8 t* f7 u/ p9 A3 R! |) }! `
    dispase？没有用过啊，是哪个厂家的，什么型号？

luyoude

用差速贴壁发分离  是将ES克隆和饲养层消化成单个细胞然后进行贴壁 还是消化时ES克隆不要消失成单细胞 然后贴壁??  后者可以清楚的看到没有贴壁的ES克隆！但这样ES克隆中是否会含有MEF啊！！前者都消化成了单细胞 有点难易辨别ES和MEF

show0ji3

我们实验室用的是减速贴壁的方法 ，40分钟到2个小时吧，看情况

艾心痕

我们实验室也是用差速贴壁的方法，我们用的是没有明胶铺板的空白皿，MEF当然是丝裂霉素处理过的。

tigerfish

建议直接用Feeder Free
' h# w  U0 r6 U( ], s, \2 y推荐STEMCELL公司的mTeSR®1或者mTeSR®2
7 U+ }2 r; m# x: j2 ]7 g' l加上MatriGel
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做之前最好对比一下有Feeder和Feeder Free的生长

Helena110

我自己也根据别的细胞邮差速贴壁现象就把mef和ES也试了试差速贴壁, 效果蛮不错的.