neurosphere culture

iseeyou1210

不知道哪位能贡献一个比较好的protocol。
( T2 A! L9 N5 X# w# J- V: v8 p6 `( `7 Q我看到publication上面说能传到p20-25，4 N. G: p( i: K) @
我做的一般就是p3-p4就没有了。4 e  q% P" d/ ]
谢谢了先！

guojingjing

我们一般是将原代细胞培养在6孔板中，3-5d后neurosphere形成，通过顺时针旋摇可以看到大多数neurosphere都集中在孔中央。然后吸取这部分培养基，自由沉降，弃去上清，留200微升左右的培养基，机械吹打分散。或者加入低浓度的胰酶消化1-2min也尝试过，好像还行。种入新的培养基中。neurosphere在传到5代后仍有，但是一般都不用5代以后的，因为在传代过程中细胞性质可能发生改变。

iseeyou1210

有些研究要看long term self-renewal，所以最好能做long term passaging.
7 F6 _+ \6 T( a+ Z' e7 u6 i1 Xfor example, ptem NSCs proliferate fast in early passages, but drop down after something p20-p25.

wzx6660

学习

smkx

跟取材的小鼠年龄有关吧

iseeyou1210

i am always using e14.5-e15.5 embryos.

lymphj198511

郭晶晶的方法好像可以试一下，能不能说的再具体点呢。比如说自由沉降多长时间？怎么能保证去上清时不把细胞一块给吸掉了呢？

ouyangjuan

回复 1# iseeyou1210 6 g6 D9 X$ b( Z

' H$ H+ L4 W  r/ @$ `
3 A7 H+ d; I3 x, N% R9 [    你可以看看这个文章！我但是就是看这个做的。还有JOVE上的《Culture of Mouse Neural Stem Cell Precursors》也有一定的指导意义。
  M; M1 t. D5 B5 ^- G链接地址：http://www.jove.com/index/details.stp?ID=152