如何从脐带提取间充干？脐带应该用什么容器运输？

tefuir

运输脐带所用的容器是什么？如何提取间充干

lina1309211983

运输脐带用灭菌的医用广口瓶就行。提前间充质干细胞有两种，一种是酶消化法（胶原酶，透明质酸酶，中性蛋白酶），一种是组织贴壁法。

uslzhang

夏天运输最好温度不要过高，提取方法文献上有详细描述
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caoyue

运输有温度控制的，最好在4℃，无菌脐带采集瓶就可以。提取的话，两种方法，酶消化，组织贴壁。

水蒸气

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1 B1 g& q; F2 ]5 _+ K你好，可以问一下你的消化法怎么做的吗

tefuir

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5 x+ n/ M& W/ N4 N3 ]- s" h9 i) r& x
在生物安全柜中取出脐带，用75%的酒精进行清洗两次，动作要迅速，然后用PBS进行清洗，直到把血水洗净。# g& q' ^7 }2 r: i/ z* n- d4 D
将脐带剪成2-3cm的小段，然后纵向剖开，剔除1条脐静脉，2条脐动脉，用无血清培养基洗两次，将组织块浸泡在0.1%的胶原酶中，37℃消化4-6h。
0 ]( C. @" F4 F$ D7 u加入生理盐水（消化液体积的2倍），2000r/min，5min离心。
6 |( M" `" Y: `: l$ ^弃上清，加入2.5%的胰酶，37℃处理30min，加入生理盐水（消化液体积的2倍），100目筛网过滤，滤液经2000r/min，5min离心，弃上清。重复两次。
9 x8 k. ^* \2 F( m& V, c( }! O$ x2 d" O弃上清后加培养液重悬细胞，进行细胞计数，调整细胞浓度用于培养。1 z/ u5 F% M9 R4 _8 O! k
每天用倒置荧光显微镜观察细胞的生长情况。
% ?- M+ n5 r, {" A待细胞长至80%-90%时，更换培养液，用胰蛋白酶进行消化。待细胞消化下来时，加PBS终止消化，加培养液按照1:3或1:4进行传代培养。