脐带提取间充质干细胞主要影响因素

tefuir

求助：最近从脐带提取间充质干细胞总是失败，原代细胞养不起来，有时候提不出来细胞，想问下各位大神，做原代提取的时候应该注意哪些问题呢？

uslzhang

回复 tefuir 的帖子( M% u8 c5 |5 j2 d

+ s0 T/ D! v' s* F  f& k8 Y# |4 Q你得提示一下你现在用的什么方法，大概步骤，大家才方便发现你的问题所在，帮你找到解决办法。

wsd950628

经常失败？是不是用的酶消化法？

shenxl1988

过程都没有，只有个失败的结果，怎么分析呀

tefuir

回复 uslzhang 的帖子
  T- e' ~! V+ M6 ^
- x6 }* i- r) N6 ^用的是酶消化法，是选择先把脐带外皮拔下来，然后剔除血管，剪碎华通胶，胶原酶消化3h，但是细胞状态特别不好，基本长不起来，血细胞会影响间充干贴壁吗

tefuir

回复 wsd950628 的帖子5 I5 |# ]! y7 V7 a! J5 J& O( _5 P
) F' ]3 O  ^; i2 z& O! s  p
恩是的，用的是酶消化法，组织块法也用了，但是爬细胞的时间很久，爬出来的细胞也不是很好，长不起来，长两天就分化了，或者消化传代，细胞不贴壁，然后细胞就会死亡。

uslzhang

回复 tefuir 的帖子  q  T4 ~( S! A% K! I1 S2 N) s6 _
: @! S# d% O, m% d/ C7 |$ _- B) `  S
血管细胞不会影响MSC生长，只是造成你培养的MSC不纯，不至于长不起来，试试脐带组织块爬片迁出细胞的方法，不一定非要用酶消化法。
8 a7 g# H0 T- j3 f9 a6 [$ v

wsd950628

回复 tefuir 的帖子
2 k" y1 X+ Q" j; q+ {# [" ~7 _1 ^0 J& \% c: W! N6 T
可能是你们的工艺上有点问题，我这边用的组织块法，细胞能够正常爬出，形态也很稳定

iytbxxg

说真的，你这种情况还真的少见，虽然你给的信息不全，可能有以下几方面原因：1、培养基的问题，因为你用了酶消化和组织块都培养不起来，建议换一两个商品化培养基试试。2、培养箱的原因，温度和二氧化碳的浓度都很重要，可能低佼准没有做好，可以找厂家过来再佼准一次。3、消化用的酶有问题，不知道用什么酶及用量，不好断定。4、样本来源有问题，特别是运输，别温度低于零度了。5、微生物污染，包括细菌真菌和支原体等，都可以检测一下。6、还有就是你操作手法的问题，虽然可能性不大，一般操作有问题也不会全培养不出来，建议换个人操作试试。

gengtongyu521

一般组织块贴壁的话，还是比较容易爬出细胞的，一般10天左右就能进行传代。尽量别用胶原酶消化，得到细胞数量太少。