磁珠分选CD133肿瘤干细胞经验之谈

jitianxing7021

大家好！我最近在分选CD133肿瘤干细胞7 z  s' T! [$ ?. I) j( _
但是经流式分析表明CD133分选之前和之后没有区别！望各位战友们能给点建议！
, p) C! j; k$ b' b" I谢谢！

zzdqyaya

1。你所用的磁珠分选磁珠是哪家的，分选的过程顺利吗？我最近也在做这个，过程不是很顺利，总是堵。所以想和你交流一下。9 c  W7 d$ M2 h
2。在流式分析中你用的抗体和磁珠的抗体标位是相同的还是不同的，之前就这个问题请教了厂家技术，他们说要选择不同标位的抗体。因为这样检测的时候，可以不受磁珠标记的抗体占用的表位的影响。

zzdqyaya

1。你所用的磁珠分选磁珠是哪家的，分选的过程顺利吗？我最近也在做这个，过程不是很顺利，总是堵。所以想和你交流一下。& h# F' O& G; o/ ]
2。在流式分析中你用的抗体和磁珠的抗体标位是相同的还是不同的，之前就这个问题请教了厂家技术，他们说要选择不同标位的抗体。因为这样检测的时候，可以不受磁珠标记的抗体占用的表位的影响。

dwc326

0 c; V, R7 K! ?5 \7 C6 ~

* X3 w2 b+ _; v/ I' \: r2 J我也是用磁珠分选肿瘤干细胞。分选后阳性率在70~80%，应该还可以了。
+ I* S; d, }1 K% c3 Q2 P( y我是查了文献，在乳腺癌和结肠癌中分选CD44阳性细胞，前列腺癌也在考虑之列，但是实际操作中标本不易获得，所以基本上就是前述两种肿瘤了。抗体用的是Miltenyi的。. \, ^" T: u( Q) z
我想你是不是要获得CD133阴性细胞啊。其实我们也发现一个现象，分选阳性细胞的阳性率在70~80%，而分选阴性的细胞阳性率与未分选的细胞无明显差别，分析原因可能是“阴性细胞”中还有大量的细胞碎屑以及其他组织中各种复杂成分。
2 N) {/ R; W% K8 K. I  @不知道你是要分阳性的还是阴性的细胞，不好说啊！！！

zzdqyaya

3 d, ~9 H) q5 k  w4 d7 o4 G
! G; E* ?+ ^% _
可能是网速的问题，才发现相同的帖子发了两遍，不好意思，不是有意的，删不掉了。

jitianxing7021

我用的是美天旎公司的
6 _" ?- k; u4 M( H0 u! A3 j- a是按照他们的PROPOTAL做的) h+ I, p& v8 a6 J! w, M1 O
感觉分选后用流式细胞仪器分选纯度达不到: e0 p& {  B. ^5 J
你的堵住可能是由于你消化细胞不足，没有将其处理为单个细胞悬液8 }4 m( p' k' Q2 a0 d2 O' ^
还有个问题. O9 Z9 u. n: `1 W
大家磁珠抗体和荧光抗体孵育的条件和时间是多少了？

wzx6660

学习中，谢谢各位

aban_61

同学习

bjchen789

1. 关于堵的问题： 一定要过滤，30um过滤网过滤后再入分选柱。
( U% V+ N7 q' r4 ?& a$ ^- a' d2. 分选得率的问题：要计算一下总细胞数，再考虑分选柱的分选量的, U! ?7 V' R* o' h" l8 T
3. 流式分析：分选的抗体用的克隆号是AC133，那么流式分析的抗体要使用另外的克隆号：比如293 . 磁珠只占细胞表面抗原的的30%，剩下的抗原要使用另外的克隆号；