做核型各步的作用都是什么？最后摔不出来应该从哪里改进？

食毕莫饥

RT
* V+ ^* y5 {- z+ x% Z# B不胜感激！

wangming

细胞状态，秋碱处理时间，低渗裂解细胞等环节

baixueyao029

看看高度是否合适，高度不够的话，核型做不出来

liulilin

核型分析的关键在于滴加秋水仙素时细胞状态、秋水仙素的量、处理时间、低渗浓度 时间、固定、滴片等6要素。   秋水仙素是将细胞中的纺锤丝切断 使细胞停留在分裂中期， 低渗时间液体渗入细胞使得染色体分散、固定时间细胞 染色体固定住、滴片不用说了 但是不同细胞 对于滴片高度有不同的要求。  如果跟不出来不就因该是细胞所处的状态没有细胞分裂。

Iris

细胞状态要好和秋水仙素处理合适，这是为了获得足够多的分裂中期细胞。& l7 p* Q& t, d0 f. n' h* A4 w5 d
最后滴片的高度恰当时为了获得分散较好的核型。
! s; c, k1 R5 ], f4 f5 p( ~不知道你的摔不出来指的是什么，操作中要注意低渗处理之后的吹打要轻柔。

食毕莫饥

好，再试试

liulilin

还有  关键看你做的是什么细胞的  不同的细胞 不同物种 其秋水仙素处理时间要求都不一样。

dxb1985

回复 1# 食毕莫饥 1 f% k9 K; a$ o/ y8 {
1.秋水仙碱处理时间太长染色体会变得比较短，不利雨核型分析，处理时间太短分裂相会比较少，具体时间你要参考别人的文献
) l4 _) B  T" V6 q( j* e2.低渗液浓度一般为75mM，低渗时要轻柔以免细胞破裂
! U- K; e/ G1 u0 y; L4 V3.固定液要现配先用，且不能有水，固定时间太短染色体有毛边，形态不漂亮，一般需要低温固定过夜8 Z, k5 u9 s" S* k6 z
4.载玻片一定要洗干净，不能有油渍，事先可以泡在纯乙醇中，负20度保存
: K' I) T6 ?. f8 o6 Z6 y5.底片高度影响不大，如果分裂相很少，你可以适当延长低渗时间，也可以重固定，还有就是载玻片的洁净程度

qgjin

给你发个论文（nature protocol），具体步骤讲得很细，再综合上述自己好好研究吧。
, Q' ?# D7 R) i1 v8 f  z百听不如一试！5 G- V! T" b5 b2 |
自己多试一试，走自己的路！
0 C9 U* `( C) F6 p  i& K7 V0 m+ M下面是摘要：
- a7 F  \! P: [! W% I; k) eSpectral karyotyping analysis of human and mouse chromosomes.- t* Y: j" `/ g5 y" G( f* d
Padilla-Nash HM, Barenboim-Stapleton L, Difilippantonio MJ, Ried T.+ M2 [& D/ E3 H5 R
/ L9 v) _4 `  `7 h4 k8 L5 s
Genetics Branch, Center for Cancer Research, National Cancer Institute, US National Institutes of Health, 50 South Drive-MSC 8010, Bethesda, Maryland 20892, USA. nashh@mail.nih.gov
2 V3 Y3 l" I2 ?' y: v) h
. ?$ D% d* E3 S' YAbstract7 W/ }; Z2 M; I/ S/ v3 e
Classical banding methods provide basic information about the identities and structures of chromosomes on the basis of their unique banding patterns. Spectral karyotyping (SKY), and the related multiplex fluorescence in situ hybridization (M-FISH), are chromosome-specific multicolor FISH techniques that augment cytogenetic evaluations of malignant disease by providing additional information and improved characterization of aberrant chromosomes that contain DNA sequences not identifiable using conventional banding methods. SKY is based on cohybridization of combinatorially labeled chromosome-painting probes with unique fluorochrome signatures onto human or mouse metaphase chromosome preparations. Image acquisition and analysis use a specialized imaging system, combining Sagnac interferometer and CCD camera images to reconstruct spectral information at each pixel. Here we present a protocol for SKY analysis using commercially available SkyPaint probes, including procedures for metaphase chromosome preparation, slide pretreatment and probe hybridization and detection. SKY analysis requires approximately 6 d.

liulilin

非常感谢大家的分享啊