人ES细胞核型检测

maxiaorongqp

1．1个6cmdish的人ES细胞生长最旺盛的一天，在培养液中加入终浓度为100ug/ul的秋水仙碱，37℃，处理3hr
/ B* {( v/ n) _3 @' ?9 o/ ^/ T2．3hr后，弃去培养液，用胰酶将ES克隆消化成单细胞9 ^# d: e- ?) x- L; {! k3 R: u
3．离心：1200rpm，5min
, j0 G& W9 z+ n( i4．弃上清，留大约500ul液体重悬细胞
, W0 ~- \: W  v3 ^  D5．一滴一滴慢慢加入10ml37℃预热30min的KCl溶液（配方见下），在37℃下低渗30min
8 c1 `9 }& I/ ?+ w8 w6．加入2ml固定液（配方见下）. r# Q, G8 f" x8 L8 t
7．离心：1200rpm，5min* R; m) `1 c) Z! P& d
8．弃上清，留大约500ul液体轻轻重悬细胞后，加入10ml固定液，室温固定10min" O8 ]0 x1 R* \
9．离心：1200rpm，5min
& z2 s/ q8 f. S9 m# z10．再重复步骤8，9两次' v1 W2 A5 |; Z- ^0 K3 ~- z$ E. D
11．弃上清，剩余适量固定液（大约200ul），轻轻吹匀细胞悬液后，滴片
" o. E9 r8 O$ r9 H6 n12．室温老化两天
. z/ x% ]7 |# x3 z13．65℃，4hr（注意要让温度自然降下来）
  ^/ l& r; J/ g3 d14．0.1%胰酶溶液（用生理盐水配，4℃保存）消化带型
7 u7 ~9 j1 w  u' R) g4 N2 O" T1 O& g15．37℃水浴消化（时间需要自己掌握30s，45s或者1min都有可能）
( I" p9 M( B+ U' W' w2 k- F0 C16．Gimas染液染色5min，镜检0 X/ u  {: u8 e5 e
; G* a4 Z) U' ~2 k2 v
低渗液KCl溶液配方：
) y+ [4 U$ Q2 r7 [9 B0.16gKCl+0.125g枸橼酸钠溶入50mlmilliq水中1 V6 v; M* H& B/ ~+ j
  s& c. X, G' _& h+ \4 e
固定液配方：冰醋酸：甲醇＝1：3
) M1 y- _! H- m3 y
3 |1 l; w( s4 p8 B7 M滴片用的是冰片：玻璃片用95％酒精浸泡过夜（去掉表面的油脂），在-20℃保存，滴片时从-20℃拿出，尽快滴上。

wuxiao101325

顶，收藏了

枕头和书

看了

hcluo

你好，最近也在做核型，但效果不是很好。请问您有没有做好的ES核型图片，能给我传一份想看看。我的邮箱hcluo2008@gmail.com。十分感谢！

zhangmingqi111

收藏

ruofan1982

谢谢，收藏了

yuangaoqian

谢谢分享

myrudy

mark

liuer0041

秋水仙碱100ug/ul?有没有搞错？