求助：新配置的培养液迅速变黄？？？？

SVZ

大家好，我最近在尝试做小鼠成体SVZ区的神经干细胞培养，在我配液过程中发现我的培养液在配置过程中迅速变黄，不知道这是怎么回事？$ w3 a8 w1 p; \0 l) n8 \7 m
4 _6 m; u+ v$ P7 S
培养液的配方如下：
% g& }/ Y3 x$ F) d) o, T" R! K, JDMEM/F12(50ml）+bFGF(1Oul）+EGF(10ul）+B27(1ML)+N2(0.5ML)+L-Glutamin（0.5ml）
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除L-Glutamin外，其他都是invitrogen公司购买的。
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: K0 m3 {' E0 V7 v  s9 U% H/ r! F基本上是东西一加进去就黄了。但是液体放置多天还一直很清亮，所以基本排除污染的可能。
6 P1 f9 ]5 ?6 k4 F* d+ Z我后来发现我分装的N2（-20度保存）冻液的颜色很不均匀，白一块黄一块的，我起初怀疑是N2变质的原因，就不加N2又重新配了一次，可还是很快就变黄了。我估计是PH值发生改变了，不知道这是否正常。各位同道是否遇到过这种情况？该如何处理？恳请高手指点，谢谢！

xiaojunhu1985

回复 1# SVZ
. r2 Y/ a. O4 M+ {在配置过程中，应该要避光。有没有避光啊？

zsc78

不知道你说的发黄到什么程度，因为像DMEM/F12本身的颜色就不是很红，有点儿棕色或棕红色（也不知道怎么形容），没有DMEM那么红，如果是这种就没有问题。如果是特别黄，就请检查你的添加物。因为细胞因子有些说明书是说用一定浓度的乙酸溶解，如果是这样就肯定发黄。

SVZ

谢谢楼上朋友的指点！: |3 G9 [% ~* Z( }! m+ Z

! A6 y6 L3 J/ b* `6 I我在配制的过程中没有避光，因为几乎所有的试剂除DMEM/F12外，都没有专门要求避光，DMEM/F12有要求说避光，但是大家经常放到玻璃门的药品储藏柜经常见光，但还是很好用。: O4 E; f: E. C/ u3 s/ f/ F$ U

9 k# ?7 @/ g# w( q4 O. I至于发黄的程度，黄得有点像很稀且清亮的蜂蜜，稍微透一点点红。我添加的细胞因子的稀释都是按照说明书来的，说明书中没有用乙酸溶解的特殊要求。

hualin840518

这基本上是正常的
7 V( b6 p% ?& Q) h; u1 ~' u, N培养效果没有什么变化吧" R) ~' V- a; k8 g4 ?5 V. U6 r# {
“黄得有点像很稀且清亮的蜂蜜，稍微透一点点红”" |) k4 r* ~2 @' F- {1 h7 d
可能是在培养液里面添加其它成分后; M: X0 \5 I3 h7 I, i8 p
PH值发生了改变所致& c' N3 s0 ^! F4 ?4 }5 B
照你的描述，应该没有沉淀生成！

cortex

这可是正常的，当你加了L-glutamin和B27及N2后，变化一点颜色（不应该说是黄色吧，不过和蜂蜜有点像）是正常的。你是否发现用着用着，他又会变红。

SVZ

非常感谢，这下我心里就有谱了。
* D' O4 W9 ^  v' B( E1 H! ^  j确实没有沉淀产生，也确实加在细胞培养皿中放到培养箱培养后会变红一些。但是4度保存的培养液一直是发黄的。
; x3 |, G3 a& {7 B, k  ^因为是新手，不知道是否必须调PH值才可以用。现在我决定再培养一批细胞，看一下情况吧。
0 j' O) H" @; F" P/ R# v& b9 |' p再次感谢！

SVZ

给大家汇报一下吧，培养液变黄，但是对我的后期细胞培养没有产生什么影响，多谢大家指点。

jennyshy

正常的颜色，我以前用pH计测过，pH7.2-7.4，用着用着就变红了。

huangfei2010

回复 6# cortex
. H/ U" h8 r- S6 s8 G7 w, J) S
, n1 l7 c! N7 I9 x* a2 t( ~, b& Y
    这位师兄，我就遇到和你说的情况一样，刚配好的培养基颜色有点淡黄透亮，加到细胞培养瓶中一夜就变成粉红色的了，感觉细胞在这个粉红的培养液中张的不好啊，请问师兄你有遇到这种情况吗