养HMSCs的一些问题

youyou0795

周末去医院拿几瓶HMSCs来做实验，不过以前养的都是细胞株，第一次养干细胞，有几个问题想向众位高人请教一下：
5 w0 E, q0 P& y' u: Y( E' w1，我们的培养基一直都是高糖的DMEM+10%FBS，HMSCs必须用低糖的DMEM么？
; z2 b6 `( U  m5 T2，养HMSCs培养瓶要额外处理么？我们以前用的都是Corning的塑料培养瓶
. q2 k6 h" ?& S: `3，HMSCs可以冻存么/?和普通的细胞株冻存有啥不一样么？
% J9 o6 O) v% Z: @/ Q4 |* l* v4，如何检测HMSCs是否分化了？
# z- E, |3 @* |6 ^& r谢谢各位大虾啦

lukerende

1我用的是IMEM  10%胎牛. _" Y7 @9 a9 i2 y7 n
2瓶子没有额外处理  和以前养肿瘤的一样的瓶子
  z" W; A. L$ G) d( c3当然可以冻存了啊   没有区别 " U0 W$ q+ W7 L5 q  [. V, u
4看形态或者是做流式细胞实验) s% m0 H2 A, ]& y9 ~& [
个人观点  该细胞很难养的 尤其是消化传代的时候 消化时间和吹打的问题 消化时间长了吧会使细胞衰老 养的细胞老化 短了吧接下来吹打很难进行  再说说吹打的问题 吹打的不用力吧很难下来 用力吧会产生细胞碎片 很矛盾啊   我到现在还没有掌握敲门

lukerende

该细胞很难养 尤其是消化传代的时候 消化时间和吹打的问题 消化时间长了吧会使细胞衰老 养的细胞老化 短了吧接下来吹打很难进行  再说说吹打的问题 吹打的不用力吧很难下来 用力吧会产生细胞碎片 很矛盾啊   我到现在还没有掌握敲门 也没有人养的好的 分享一下您的详细过程  推动干细胞事业的发展

youyou0795

谢谢大侠，
' F  r2 f6 O" ]我听我老师讲 消化的时候放到培养箱里30s，然后拿出来吹打，她说她们在美国都是这么养的 ，经供参考~~5 n; u' O7 }4 w& x

. L3 U& c2 z7 t7 m7 Q回复 3# lukerende

lukerende

你自己实验看就知道了  我也是在培养箱里面消化的 可拿出来吹打的时候很难吹打下来的 方便你去问问你们老师 具体的过程吗 就是说消化你们是要离心消化还是直接把胰酶倒掉  420852735  我的QQ

why121

我用的是脐带血源的 培养基是买的stemcell公司的专用培养基 ，现在刚做了原代 也很关注纯化的问题，有文献报道是3-5分钟 但没实际用过 希望有这方面经验的不吝指教~谢谢。关于楼主的问题 MSC有个特性就是贴塑料瓶子 应该是可以的 但有文献报道用FBS包被过会好些 具体没这样做 冻存是没问题的 干细胞嘛 --自我更新和分化潜能的嘛 （个人愚见）

nana0212

对于消化，我做过的是37℃培养箱2min，那出来镜下看已经基本都下来了，再加培养基终止胰酶，然后轻轻吹打下。再移到离心管里离心去弃液。书上也差不多这么说的。' M5 D5 q  ^# m$ V) d
新人愚见~

宥宥自得

我在消化过程中也发现比较难细化下来，而且传代后死掉的细胞比较多。有谁有好的方法吗？或是应该注意问题，请指教。谢谢啦1