干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

 

 

搜索
朗日生物

免疫细胞治疗专区

欢迎关注干细胞微信公众号

  
查看: 24644|回复: 5
go

[请教] 求救:免疫荧光染色中抗体的选择 [复制链接]

Rank: 3Rank: 3

积分
302 
威望
302  
包包
311  

优秀会员 热心会员 积极份子 金话筒

楼主
发表于 2010-7-25 12:36 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
免疫荧光染色中 所选择的一抗,二抗 以及封闭液中serum 他们之间的关系
  ]& a3 M7 [% I# ?* Q+ V' G# t再者就是: 怎样选择 上述试剂 才能染成最佳的效果?
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 5 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 5   查看全部评分

Rank: 1

积分
威望
0  
包包
4  
沙发
发表于 2010-7-25 12:50 |只看该作者
抗体买来之后要检测看效果,效果好的按要求保存都没什么问题。  L3 L4 Z$ D4 W# g
封闭液又几种配方看做什么了。通用的这几个都很好用都能做的出来。
4 I& ?1 Q* |  ^5 i* F: n关键是实验操作时注意时间的把握和洗脱时间次数。、
7 @: _+ i4 K! q# z; T楼主要做哪方面的实验
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 3Rank: 3

积分
302 
威望
302  
包包
311  

优秀会员 热心会员 积极份子 金话筒

藤椅
发表于 2010-7-25 12:56 |只看该作者
回复 2# 枕头和书
3 e5 j: E0 P7 |2 K- u* Y0 l
% G& K6 g! k1 ?. X1 A
6 ^' }2 @! g+ C0 }4 s+ z" s3 ]我想做精原干细胞的免疫荧光染色 但对抗体的 选择和serum的选择上有点左右不定,因此来这里请教一下

Rank: 3Rank: 3

积分
302 
威望
302  
包包
311  

优秀会员 热心会员 积极份子 金话筒

板凳
发表于 2010-7-25 13:06 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
1. For confocal laser microscope observation, Isolation cells were plated on a chamber slide with MEF feeders.3 X+ d3 F, E+ E0 u
  2. Cells were washed twice in PBS and fixed with 4% paraformaldehyde in PBS for 15 min at room temperature.- v: _- c7 [8 N% m2 r7 f% I) i: m
  3.  Fixed cells were permeabilized with 0.5% Triton X-100 in PBS for 10 min. : b, ^! M% n% B3 z& s$ \# K; R$ D
步骤3后 要不要用PBS 清洗后进行以下步骤?  P0 A8 g& G: m# R0 C. L
  4. Then cells were blocked with 5% bovine serum albumin in PBS for 1 h. 9 E2 J# W6 |9 l9 |* X2 W7 p( E
  5. The cells were incubated with primary antibodies for 16 h at 4 ° C. (过夜?)
; H, r+ ?" q4 z( ^( Z/ w& E- S) g 6.  The Cells were washed twice in PBS 。1 J( h, {' x% j# m. u9 n7 d' i
  7. Then the cells were incubated with secondary antibodies for 1 h at 37 ° C.5 J6 v1 _9 t4 W5 U: D$ E
  8.  For nuclear staining, the cells were stained with Hoechst 33,258 for 15 min at room temperature.
( a6 b0 @- u# x% O0 B1 w3 B: w
4 {- w4 K: X- h8 R4 G* K请大侠 批评改正
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 3Rank: 3

积分
773 
威望
773  
包包
1251  

金话筒 优秀会员

报纸
发表于 2010-7-25 15:06 |只看该作者
封闭液如用serum,应用二抗宿主来源的serum,不能用一抗宿主的serum。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 1

积分
威望
2  
包包
58  
地板
发表于 2010-7-25 20:11 |只看该作者
细胞固定用-20度甲醇,可以不需破膜
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 5 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 5   查看全部评分

‹ 上一主题|下一主题
你需要登录后才可以回帖 登录 | 注册
验证问答 换一个

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备2021004615号-3 )

GMT+8, 2025-6-2 15:08

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.