求助：小鼠卵母细胞超排的资料以及操作流程

hcluo

哪位高人有小鼠卵母细胞超排的资料以及操作流程，里面最好包含各种试剂的含量，以及注射的剂量和时间（PMSG  HCG），取卵母细胞的部位和方法等等。十分感谢啊，等着急用。

张也行

这个我没亲手做过，但是在小鼠胚胎操作手册上看过。下载地址：http://www.stemcell8.cn/viewthre ... hlight=%D0%A1%CA%F3: T2 `5 ~8 j  {4 E6 O( {: I0 R4 c
里面说的很详细。

hcluo

我没法下载 （PDF电子书：小鼠胚胎操作实验手册）里面的东西，你能提供资源吗，十分感谢了！

ailuomansi

第一天   小鼠腹腔注射  PMSG 5-10IU/只（配比好的液体为0.1ml/只）; z- q( @+ w3 j% f
第三天   腹腔注射hCG   5-10IU/只
7 j5 m+ g* Y, a/ E  s- G随之合拢（或种公鼠或结扎公鼠或不合拢取MII期oocyte）! R+ d# g9 Y3 l0 x+ p( k2 R8 k# ?
第四天 早上 检查阴道栓（见栓当天可视为0.5天）（1cell 原核胚）取卵在输卵管壶腹部 撕破壶腹部，释放合子
! H8 u0 l# R( S) w5 ]  R第五天  1.5天
& s* i6 Q. x/ C1 X* b9 M第六天  2.5天 (morula)  取卵 在输卵管和子宫  冲卵+ ]0 _! h# p* {3 N# J  y
第七天  3.5天（blastocyst）取卵在子宫        冲卵6 f8 c# y6 X$ R! Z5 v# B
注射时间要按照小鼠光照周期来判定。

healthlicn

我补充一下，在注射hCG12-16小时后，可取出卵巢，用机械法或酶解法或两者结合的方法取出卵子，再在CZB等培养基中体外培养至GV期，再体外受精。

qgjin

楼上， 牛人！

懵懂干细胞

小鼠解剖图.pdf (1.54 MB)

2010-8-10 20:27 上传

请用IE浏览器下载
下载积分: 威望 -2 , 包包 -5

0 j+ w( g7 X- u! ?3 }! B9 s
我实验小鼠是昆明白。地理位置不同的话，时间差也是存在的。我把我的方法介绍给你吧，另外也给你个小鼠解剖图。
$ s0 J% F0 Q. [$ V 下午2:30左右注射PMSG，我们使用了100个单位
* C' ^9 \! Y: s6 f 48小时后注射人绒毛膜促性腺激素（HCG）; }+ L& g  ^7 j( U
次日上午8:30左右观察母鼠阴道栓出现情况。出现阴道栓的记为孕0.5天
% O" j( b4 Z; v" H 取孕3.5天的母鼠，脱颈椎处死，浸泡于75%乙醇中消毒。5 o6 i* E, g. G# F7 t4 Q3 g0 F
从酒精中取出已消毒的母鼠，剪开腹腔，充分暴露子宫及输卵管、卵巢。3 g2 ^* `+ P- b+ \" n9 B" J7 j, L
仔细分离子宫系膜，尽量去除子宫系膜及粘附在子宫及输卵管上的脂肪及系膜组织。
4 t" F! _* n; G% M1 \  N: { 镊住子宫端，剪下输卵管近卵巢端。$ h. l! Q0 W6 k. }5 H( y
剪断输卵管近子宫端，部分保留子宫。! _9 y% U' T3 q  D! @3 y
在无菌滤纸上吸干血迹，置入无菌培养皿内。# t) X* h/ V3 S" i5 b
用1ml无菌注射器吸入冲卵液，从子宫角端进针，保证针头进入子宫腔内，将冲胚液快速推入子宫腔。每侧子宫注入冲胚液0.2-0.5ml，冲胚液能将胚胎冲出。3 d9 L( [: E- p" {. ^, ]" [9 d: C
事先制备好吸卵针：将毛细吸管在火焰上拉细，并用砂轮断末端，制备吸卵针。
# F7 C! W  n8 X) k( g" d& H$ P 将盛有胚胎和冲卵液的培养皿置于50-100倍的解剖显微镜下，用吸卵针收集胚胎。3.5d胚胎一般处于囊胚期，但也可能处于桑葚期，均可使用。
# K3 h3 S6 O0 o, y1 Y2 Z 选取形态饱满，发育良好的囊胚，用吸卵针吸取，放入预平衡的昆明白小鼠囊胚培养液中，放入37℃，5%CO2，饱和湿度培养箱中培养。

hcluo

谢谢了，很详细啊。