如何解决试验样品污染问题以及消化时间问题

悠悠星雨

8 U: I' S/ y3 q9 Q6 N) B
  _5 ^5 R( i3 S" M5 }, h# u
我做的是牛羊间充质干细胞，样品是从屠宰场送来的。一般是2个月左右的胎牛。但是送来的样品污染比较严重，我不敢用酒精泡太久。不知各位大侠有没有什么好方法来处理这样的样品。
. M2 W! s9 Q, a. v, ]- W7 c) O还有就是羊膜的消化时间，现在参考的都是人羊膜，而且基本都是足月的。所以我现在对这个牛的羊膜消化时间掌握不好。不是消化的太久，细胞都死了，就是消化不充分。

why121

那只能在外界条件不变的情况下设定个范围摸索了 人羊膜的我们实验室的人是用胶原酶和胰酶一起消化的 但具体也不是很明白 祝早日成功

悠悠星雨

回复 2# why121
  X! a/ v( L6 }$ F8 j9 l) f$ ^
6 H7 s3 U* V3 v% Z8 V( k
4 z* g0 w' t0 U- V+ t& N    谢谢，看来也只能慢慢摸索了

sfk06

污染的问题一直都是细胞培养过程中最让人头疼的，虽然对细胞污染有些应对措施，但是都有诸多的弊端，不能最终从根本上解决。所以一般情况是无法彻底挽救的。你试试能不能得到些没有污染的样品。

chuanbaozang

关于污染，既然你已经知道不可避免的污染了，我觉得还是选择加有较高浓度的抗生素（1000U）的PBS来冲洗，并且对组织有选择性的进行后续实验。在实验过程中多进行冲洗，记得哪曾经说过，每一次洗涤都可将细菌降低两个数量级。酒精浸泡可以在组织刚拿来的时候进行，不过不能时间过长，否则细胞不保啊& p( e, [# z( {; s- Z
消化可以选择胶原酶试一下，它相对温和，对细胞损伤较小，并且终止反应是浓度依赖的，可以稀释后离心就可以去除，或者可以配合一下别的酶使用，效果应该更好些。5 C0 b" h" _8 q6 @( H
希望你实验成功！

宥宥自得

关于污染的问题只能靠抗生素解决了。但是消化的问题，用不同的消化酶会消化下来不同的细胞，对人的羊膜来说胰酶消化下来的是上皮细胞，胶原酶相对温和，对细胞损伤较小，消化下来的MSC.