[求助]小鼠胚胎干细胞核型图，大家帮我看看！

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炎炎夏日裸体暴晒数小时不吃不喝跪烧红的铁蒺藜求大家帮我看看下面两张图处于什么状态，为什么会是这种状态。1 S  S. N+ r3 G" }, l1 v  G" Z
秋水仙素浓度是300ng/ml处理5小时，低渗液是0.075M KCl 20分钟，离心是1500转/分钟，消化是0.25%胰酶20秒，染色是PBS：Giemsa=1:9，固定是甲醇：乙酸=3:1
5 D% z- R) m3 \绝大部分细胞的状态都如下面两张图所示
1 D) r1 L  N- H) L
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' X+ k2 }: M+ Y" v% E6 L: s7 J- H

: Q" R; R2 Y! {: y. `0 Q) Y  q9 a' R( |
小弟我跪谢了。

maxiaorongqp

悲剧啊

胡问成

回复 2# maxiaorongqp 1 C2 T7 p! e3 y' a) Y2 s% b( Z* [
. C8 U8 q$ N" ?. c. x3 `
( K6 W" M+ f  q) s
   明显低渗处理不够，时间短了，建议KCL处理1个小时，一米高滴片

hawkyiger

最近做核型也很不顺，细胞中间有些染色的点状东西，但没有可见的染色体

胡问成

回复 3# 胡问成
) p+ W+ j! N- ?# x' C4 {# b1 v* ~9 B3 Z5 W' j. t0 p
9 Y6 a& j% p1 ]# D
    秋水仙阻滞是要小体积 37度

天鹅骨

请问各位做完片子怎么分析呢？只是记染色体数 还是会用核型分析软件具体分析呢？
' i4 l" N* j+ V( T! u用软件分析的话 大鼠和小鼠差异大吗？会分析小鼠核型的可以分析大鼠核型吗？
$ S: h% U% a7 c3 b2 }有人会分析大鼠核型吗？* S  K# V. F. f( M3 V
多谢多谢！

iseeyou1210

一般看es细胞的karyotype就是数数染色体的数目，小鼠是40条，大鼠是42条。
2 Y, Z8 \- x  ]' c最好能多计数一些完整的分裂相。

iseeyou1210

我觉还有一个问题是trypsin的处理时间，es细胞是成团生长，dissociate的不充分也不好，我一般是用0.25%的trypsin处理10分钟，充分dissociate ES细胞后，然后低渗20分钟 at RT.
0 h# R- E" ?  n1 h4 Y4 r细胞的浓度也不要太大。4 _5 A6 m$ ?# o; ^8 o# a
我觉得1米 drop和0.5cm drop结果都一样。4 Y) Y( L* n4 a( S0 \3 O. c4 a
我都是用叫10ul直接到slide上，也不错。
4 Z/ E# p3 y% v* O" ~还有，我从来都没有看到过publication说低渗1小时，我觉得太多了。

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回复 5# 胡问成 7 I# Z; }1 S" M9 D
4 S, |2 S1 [2 J8 G

9 P; n& \% b3 z9 T    小体积是什么意思？

cuicuienya

ES的核质比很高，不用低渗那么久的
8 o# t9 {" w) q1 x) M& H秋水仙素处理的时间也太久了