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[求助]小鼠胚胎干细胞核型图,大家帮我看看!   [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2010-8-9 21:44 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本帖最后由 wwwsdzsgov 于 2010-8-9 21:46 编辑 $ k4 w+ F( j$ d3 |, ]

8 C4 Q5 v+ Z: q8 C炎炎夏日裸体暴晒数小时不吃不喝跪烧红的铁蒺藜求大家帮我看看下面两张图处于什么状态,为什么会是这种状态。
7 }" Y/ d6 n; q% V5 e/ t' v5 G秋水仙素浓度是300ng/ml处理5小时,低渗液是0.075M KCl 20分钟,离心是1500转/分钟,消化是0.25%胰酶20秒,染色是PBS:Giemsa=1:9,固定是甲醇:乙酸=3:1
+ g' F* D( U$ n9 I6 H; R# K: l绝大部分细胞的状态都如下面两张图所示$ L% j- S) C. Y1 s' r
- w2 K/ ^6 k, N( v/ W4 h
, v  J. G# a3 F2 H- q

8 j" T9 o" `1 f: V0 V3 a
; G: Q( a7 S4 ?! E1 Y) R2 P, h6 o
小弟我跪谢了。
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沙发
发表于 2010-8-9 21:52 |只看该作者
悲剧啊

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藤椅
发表于 2010-8-9 22:01 |只看该作者
回复 2# maxiaorongqp , z, s: C+ E! ^7 R8 c7 ^: m4 u, O
! R# |( m$ ?  }

& ]8 `' r& J7 }( ^3 a- m# s- z   明显低渗处理不够,时间短了,建议KCL处理1个小时,一米高滴片
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板凳
发表于 2010-8-9 22:03 |只看该作者
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最近做核型也很不顺,细胞中间有些染色的点状东西,但没有可见的染色体
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报纸
发表于 2010-8-9 22:04 |只看该作者
回复 3# 胡问成
& i3 ]. }3 w: l* e4 e& J7 N  L% W- g+ N

" [  g, }$ z  P) Y, Z" F    秋水仙阻滞是要小体积 37度

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地板
发表于 2010-8-9 23:12 |只看该作者
请问各位做完片子怎么分析呢?只是记染色体数 还是会用核型分析软件具体分析呢?7 k$ w: _. {2 ~9 E7 `* F
用软件分析的话 大鼠和小鼠差异大吗?会分析小鼠核型的可以分析大鼠核型吗?
' ]& V2 Z( v+ J! _5 V有人会分析大鼠核型吗?0 {* |9 L0 ^/ o; r( G
多谢多谢!
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发表于 2010-8-10 02:16 |只看该作者
一般看es细胞的karyotype就是数数染色体的数目,小鼠是40条,大鼠是42条。' t4 F, W9 X2 G  [( z
最好能多计数一些完整的分裂相。
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发表于 2010-8-10 02:19 |只看该作者
我觉还有一个问题是trypsin的处理时间,es细胞是成团生长,dissociate的不充分也不好,我一般是用0.25%的trypsin处理10分钟,充分dissociate ES细胞后,然后低渗20分钟 at RT.$ C% W' N1 i8 ^* e& T& q! a
细胞的浓度也不要太大。
- u! w- p1 Y* d8 b9 t; Y2 |7 P我觉得1米 drop和0.5cm drop结果都一样。7 R2 G; r2 y  H) X+ H
我都是用叫10ul直接到slide上,也不错。
' a  x& b) c& l. C5 r6 z" _还有,我从来都没有看到过publication说低渗1小时,我觉得太多了。
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发表于 2010-8-10 09:35 |只看该作者
回复 5# 胡问成 ( I1 p# ^) K2 `* ?1 G  K1 ~1 M

8 j- [4 I" I# d6 ]: J  h; c. `. U! o2 t% P" N
    小体积是什么意思?

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发表于 2010-8-10 15:44 |只看该作者
ES的核质比很高,不用低渗那么久的
4 \. j. Z  p9 Z- y7 u( T秋水仙素处理的时间也太久了
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