求助：关于ESC对于G418浓度梯度的确定

cony

大家好，我近期在做ESC对G418的最佳浓度，现出现问题了。第一，加G418培养ESC的第三或四天开始，MEF连同ESC从12孔板边缘开始卷缩，之前做过一板，还没到10天就已经缩成米粒大小乳白色物体；第二，未加G418前，细胞状态不错，并未见污染，但是当加G418后，可能由于死细胞较多，出现许多会动的小点点，怀疑是出现污染；第三，由于本人没有NEO-MEF FEEDER，所以筛选时FEEDER是用普通的。
" v/ L( X; @5 {' i       还有就是在做梯度时，非得要筛10-14天吗？ESC繁殖很快，隔天就要传代了，而且要每天换液，每三到五天换液是否对ESC本身生长就是一个挑战？如做个一个星期或更短的筛选可行性如何？7 m# J4 P9 h# B2 J5 J5 m
        请做过或了解的朋友帮帮忙，在此谢谢大家了！

BDFCM

这么老的问题怎么还没有人回答呢？我也遇到这个问题，从别人那里要来的小鼠ES细胞系，是G418抗性，但不知用多大的G418浓度。有谁大神做过，分享下？