阻断细胞内某一特定蛋白的表达

weiyepan

其实不需要突变结构域的这么复杂的，比较简单的方法是，突变掉起始子和终止子的位置就可以了，但是前提是这个基因的mRNA没有其他剪接方式。
2 E* l& E! m" p* ]5 S/ v; a不过我们以前做过把Pfu突变掉聚合活性，剩下外切活性的克隆，也只是突变一个点就可以了，不知道楼主的是什么基因；如果在体内突变，筛选就比较麻烦了。
4 d% ?  G# [' @1 R3 y+ E至于突变连接部分，氨基酸是需要仔细选的，好像蛋白水解酶就几种吧，丝氨酸的，苏氨酸的等等，具体忘了，只要突变掉这些氨基酸，应该就可以忽视水解酶的作用了吧。

hxf_86

回复 11# weiyepan
1 j2 {0 Z2 ~" C& O8 X' _- x8 b0 g: A; h. {2 a

; g, I) b9 R- j" j    不是在体内突变的。
9 Q% O2 a& i# P8 l! X: N0 r/ R很感谢您的意见啊，我会好好考虑的，有什么问题再请教您哦～

hxf_86

回复 9# sunyucheng * y; P7 I. ~4 o9 a4 P* m

: T* D5 ?, k8 G! T5 @/ |9 ]
* P* _3 l+ Y' y8 b" M' m+ U    非常感谢哦，我会好好看看这方面的内容的～

mqz_11

可否用定点突变。直接吧B蛋白的活性中心换个AA，，不太影响结构，但是就没活性了。。。。

hxf_86

回复 14# mqz_11 0 U5 g* n5 E8 T( Y* A& W$ V
% x/ j# ~5 p6 d% O& r. A0 V

% B, A% z* q% R) n    随便换一个AA就可以达到目的？
) r' I. R; p2 L谢谢哦～

hxf_86

继续跪求高见～～～～～～～～～～

open1230

谢谢！

weiyepan

回复 15# hxf_86
% ^0 O* q. S$ g; @% ~$ k3 @随便换AA不行的，最好的方法是终止掉翻译，直接换成终止子终止掉。

hxf_86

回复 18# weiyepan
. E- e% x1 h/ o* n
/ ]4 H" a" o* A0 |* q$ ~! G
2 f4 D6 R+ B! }2 I/ G% a    谢谢~