阻断细胞内某一特定蛋白的表达

weiyepan

其实不需要突变结构域的这么复杂的，比较简单的方法是，突变掉起始子和终止子的位置就可以了，但是前提是这个基因的mRNA没有其他剪接方式。# w5 Y  n5 v; J2 U
不过我们以前做过把Pfu突变掉聚合活性，剩下外切活性的克隆，也只是突变一个点就可以了，不知道楼主的是什么基因；如果在体内突变，筛选就比较麻烦了。  t2 o# [& j8 b/ o  R0 |5 J
至于突变连接部分，氨基酸是需要仔细选的，好像蛋白水解酶就几种吧，丝氨酸的，苏氨酸的等等，具体忘了，只要突变掉这些氨基酸，应该就可以忽视水解酶的作用了吧。

hxf_86

回复 11# weiyepan $ q& ]: N, {% Q( H) C

/ o3 o! i+ u1 |* ]# W) N3 I
: @  g8 F( w9 y6 T; b5 n/ f" w    不是在体内突变的。
& R! M4 f. x* d6 Z: B很感谢您的意见啊，我会好好考虑的，有什么问题再请教您哦～

hxf_86

回复 9# sunyucheng : e4 E+ J$ H: p9 s% s- `
$ O" Y" Y& o3 \6 J# b

5 w" O% {' O& T, L    非常感谢哦，我会好好看看这方面的内容的～

mqz_11

可否用定点突变。直接吧B蛋白的活性中心换个AA，，不太影响结构，但是就没活性了。。。。

hxf_86

回复 14# mqz_11 ( ^$ J9 W) u" m. k8 a2 U6 m
& d* u3 H. {, G5 S$ M9 d
% m' \/ v5 w2 [- X+ D3 a$ I
    随便换一个AA就可以达到目的？
& a" e$ e8 v  f/ `; L谢谢哦～

hxf_86

继续跪求高见～～～～～～～～～～

open1230

谢谢！

weiyepan

回复 15# hxf_86 ( v! G5 _: r# P* }0 j+ d
随便换AA不行的，最好的方法是终止掉翻译，直接换成终止子终止掉。

hxf_86

回复 18# weiyepan + |: _8 N0 s. |7 y. |

0 x0 e# Y- n+ _$ }* ]1 o3 x
: L% e# |7 n& e8 E* j( {" m' @. O    谢谢~