MSCV-IRES-GFP的详细图谱

彩虹

请问有使用MSCV-IRES-GFP这个逆转录病毒载体的吗？我想知道这个载体的详细图谱，有的可以分享一下吗？谢谢

深海寂寞鱼

! y1 H! `2 e: W$ a
& s5 D/ F* b9 a+ U7 D" N& d2 Q
楼主，你好。
2 Q$ p& f0 ^2 G* U' b! C
& c# _: h! W9 g( p: y& t1 K你所说的载体是一个改造而成的载体。/ b& ^, |' w8 P* m5 G

4 o; O3 n/ U" i3 j按照Addgene网站上的说法，是把 pCITE IRES hGFP-3M 载体用EcoR I和Sal I 酶切后，获得IRES-hGFP-3M。然后插入用EcoR I和Sal I 酶切后的MSCV2.2载体。$ u' D/ T0 i/ X* C( @/ f* K' y- s

2 v* U( j; |/ T3 n9 |  Q详细的图谱如下：
5 y8 j# r' I4 r# T( Y5 B
/ A. [( k6 z9 p& d
2 E2 r# k2 q4 V* Y2 C
1 H; S) u; E4 N" Z# j
  X! A+ K- m8 N- H/ w2 U另外附上pMSCV的说明书，供你参考。  ; k) h% w: h4 j0 @6 K) Z* m

zhangcuiping

回复 2# 深海寂寞鱼
. u5 U; N5 H- N# X' [1 Q非常感谢您的回复，谢谢

youyan1228

回复 深海寂寞鱼 的帖子3 _% B, d( f& n* v
0 k3 j# r  M2 @" N8 J
请问您有这个质粒吗

youyan1228

回复 zhangcuiping 的帖子
- b' ?$ L# I+ n9 y6 H4 H$ m2 f! T+ M3 R+ u8 d2 K! U
请问您有这个质粒吗，能否分享，谢谢

Jing937

请问您有这个质粒或者知道国内哪有卖的吗？谢谢！

runsong

我奉劝你千万别用这个载体，以及所有PMSCV系列载体。  d- G; \) [5 v; Z& V+ g" Z
这些都是逆转录病毒载体，包装效率、感染率都很低，面临被淘汰的命运。可以注意一下应用逆转录病毒载体的文章现在已经很少了，慢病毒载体已经更新3代了，逆转录病毒载体几乎无人问津、没有发展。. S) ?7 i' T1 r6 K, A
我曾经用过这个系列的载体，MSCV-IRES-GFP的表达效率低得可怜，60皿中转完后就1、2个细胞是亮的，更别提攻毒了。用PMSCV做的载体我他妈的反反复复折腾了一年，连病毒颗粒都没得到。期间我还构建了PMSCV-GFP载体，转PT67后就5%能亮，攻毒四次后目的细胞完全没有GFP的表达。真他妈不知道用这套系统的文章是咋发的。
8 W1 ^2 O2 @% X% u; f我们实验室有个博士，和我一起做这个，他比我强，但折腾了两年也没得到稳定的结果。诚实的他在他的博士论文里只字未提他这方面的工作。

runsong

嘿嘿，我宝贵的一年时间全浪费在这里面了。+ j1 E) W* ^8 P  F
我建议你顺应潮流，做慢病毒吧，资料相对要多得多，效果相对要好很多。* ]0 T  L  ]6 l3 @* J
如果不要求稳转，只是想提高转染效率的话可以用腺病毒。操作更简单，转染效果更好。
% t1 F2 W/ U+ x
4 ?9 ]+ Q, T/ z+ b/ c: j; ?当时我老板得到这个载体像得到宝贝似的，然我做这个。是啊，别人给的东西不花钱，总想低投入高产出。哪里有那么好的事。

runsong

看看我“不再自残”的签名，那是我那个时候的伤疤

ada800515

请教一下runsong ，是不是所有的逆转录病毒载体都转染效率低啊？我用pMX-IRES-GFP转染时效率也特别低，不知道你是否用过这个质粒啊？