请教有关核移植问题，谢谢！

zhaoyan1983

1.核移植是将整个胎儿成纤维细胞注入去核卵母细胞，还是将供体的核注入去核卵母细胞，因为看文献时发现它是直接将供体成纤维细胞注入去核卵母细胞中，所以不太理解。
$ s9 z+ f# h" ~8 A0 N2.如果是直接注入供体细胞的话，那么供体细胞所携带的胞质应该怎样处理？
3 T- R- X; ~) W5 x3.第一极体是依附在卵母细胞膜上的一个比卵母细胞肖几十倍的小泡泡吗？一直不确定它到底是不是第一极体。

chiangmax

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1.核移植是将整个胎儿成纤维细胞注入去核卵母细胞，还是将供体的核注入去核卵母细胞，因为看文献时发现它是 ...& p, Q. r# A( Z5 M6 I  z1 J
zhaoyan1983 发表于 2010-9-14 01:07

# E* W, l6 R& \6 b, A9 H1、核移植是将体细胞注入去核的卵膜与ZP间隙内，然后通过融合的方法；或者将体细胞直接注入去核的卵子，构成重组的卵子；
  T* F% U: r- q4 B2 l) {, l2、注入体细胞应当先破膜，注入时尽可能少带胞质；
7 K1 B- i4 r; s. s3、极体是乱母细胞减数分裂时排到透明带间隙内的，但是体积比较小；直接注射的方法构建NT卵子不需要去除PB1，但是融合方法必需去除，否则影响融合时手工排队。

chiangmax

4、有的时候容易把细胞碎片误认为是极体

have-a-rest

1.核移植是将整个胎儿成纤维细胞注入去核卵母细胞，还是将供体的核注入去核卵母细胞，因为看文献时发现它是直接将供体成纤维细胞注入去核卵母细胞中，所以不太理解。* `' `" |: y4 u8 ]- w0 ~4 z
一般是注细胞，体细胞本来很小，很难去核的，目前认为卵细胞的胞质具有重编制功能，体细胞细胞质在核移植中的作用也许有待进一步研究，说不准会有很大发现。
: @. c0 f/ H4 A5 b2 t2.如果是直接注入供体细胞的话，那么供体细胞所携带的胞质应该怎样处理？' J& @: U5 t% |( b+ F# ?7 B
注射前一般要处理，往往选择处于某一分裂相的细胞，也有研究发现细胞周期不重要。
# ]9 Y" [, j" Q7 @* h9 V3 d: b3.第一极体是依附在卵母细胞膜上的一个比卵母细胞肖几十倍的小泡泡吗？一直不确定它到底是不是第一极体。5 ?4 S" D& a6 S7 Y* J  c
第一极体在卵周隙位置，不会跑出透明带，还是好看的，有必要的话，调整角度观察。
- r2 H: K, ~; i5 a4、有的时候容易把细胞碎片误认为是极体
% L2 F6 \2 V4 i2 M. k0 }$ t3 S只看透明带内部的，一般不会看错。

hndxws

核移植所需的供体细胞核是这样得到的：首先得到单个的供体细胞，然后用大约20-30微米直径的玻璃管来吸取供体细胞核。得到核的具体操作是玻璃管口对准供体细胞，吸取供体细胞后，在管口来回吹吸几次，胞质部分自然就会被吹碎，核被吸入玻璃管内。每次操作一般吸取几十个供体细胞核，然后一一注入去核的卵母细胞内，网上应该有这方面的视频的。

chiangmax

核移植所需的供体细胞核是这样得到的：首先得到单个的供体细胞，然后用大约20-30微米直径的玻璃管来吸取供体 ...( r2 s: U: [+ y  r) P
hndxws 发表于 2010-9-14 23:41

+ H: B- y, @! _5 h% m4 }: {, z8 d
大侠，什么细胞啊需要这么大直径的注射针？可以并排进3个细胞了都，怎么破细胞膜啊？I服了U

hndxws

回复 6# chiangmax $ f$ O& }) g+ s6 R/ A) t* H, s, H
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没用过不代表没有，对于直径小于20微米的细胞当然要用5-12微米小点的玻璃管了。细胞直径在10-100微米，一般在20-30微米，这样的针孔能并排进三个细胞，可能我说的有点过了，但你不觉得你说得也很夸张吗
% e- r' U2 ?  q" K  @/ C本文来自干细胞之家  - 中国干细胞研究员的交流论坛，http://www.stemcell8.cn，详情请看：http://www.stemcell8.cn/viewthread.php?from=notice&tid=27115

chiangmax

7 f; p8 f- j  P. b  L$ `

回复  chiangmax
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* [0 y2 F5 ?" n0 n: I8 `& `2 B没用过不代表没有，对于直径小于20微米的细胞当然要用5-12微米小点的玻璃管了。细胞直 ...7 T: A! P) r6 m! U8 G5 D
hndxws 发表于 2010-9-15 23:23

' N3 K; H% q& O, e5 [0 C请问您用的什么细胞？我做的牛、羊、猪、兔、小鼠都没有这么大的直径，您说注射针直径是30um，那么也就是说你的细胞直径起码大于30。我的理解对吧？因为你是用来破细胞膜的，起码细胞直径要大于35um以上，因为不是通过融合方式的NT.

chiangmax

有疑问就要问，王道