Fibronectin包被后为什么要用BSA(牛血清白蛋白)封闭呢

chinajinlei

请教，在用Fibronectin(简称FN)包被培养板等基材培养细胞的时候，一些文献上说FN包被之后要用BSA(牛血清白蛋白)进行封闭，然后再种植细胞。( Q; e# {7 u0 j' m3 j/ ?
(1)请问大家在FN包被时候都用BSA封闭了么？
) c( f$ S7 ?# Q! X  W# H(2)为什么要用BSA封闭，封闭后会不会对FN表面的细胞结合域产生影响进而影响细胞的粘附呢？! S' ~1 D* a. `( H0 H) ~

- E+ z( |) m5 T3 A# Q例子：
( s5 f, n! s# `“实验组以不同终浓度的FN(0, 10, 20, 40mg/L)包被96孔培养板和24孔培养板, 4℃过夜。PBS轻洗3次,加入20g/L BSA溶液, 37℃封闭2h。对照组不加FN,只以20g/L BSA溶液封闭2h。DMEM漂洗3次,超净台内备用。设实验组、对照组和空白组,空白组只加培养液,不加细胞,用于比色调零。每个浓度设4个复孔,实验重复3次。”[1]! j" _+ q+ N5 j# Y5 [" k
[1]刘驰 and 付荣嵘 (2009). "纤维连接蛋白对人晶状体上皮细胞系的增殖、黏附和移行的影响." 国际眼科杂志 v.9(08): 1458-1460
4 O; m. _) S# Q; G5 b7 B
; `  |$ p! A! h. `The coating procedure involved dissolving the matrix protein in phosphate buffered saline (PBS) at a concentration of 50 ug/mL and using it in 12-well culture plates (200 uL per well). Plates were left at 4°C overnight, washed with PBS, and incubated with a blocking agent (1% BSA) for 2 hours at 37°C before the onset of culture.[2]2 C7 H- G* g2 Q. O. C: V( s
[2]Jiang, F., Y. Z. Jia, et al. (2002). "Fibronectin- and protein kinase C-mediated activation of ERK/MAPK are essential for proplateletlike formation." Blood 99(10): 3579-3584

supergama

7 ?1 L, F5 X- Y2 o+ T" W4 R+ h0 X: |' Z( H
第一，Fibronectin封闭的问题
% @/ R" M7 p+ A" P1 G1、fibronectin蛋白除了结合细胞（通常是integrin）的位点外还有其他活性位点（如collagen，syndecans等），这些位点可能会影响细胞的培养属性，需要BSA封闭。
# @" g9 M  T- B& h, \$ T, O* D2、fibronectin常用来源是血浆，所以难免混有趋化因子等分子，这些也可能影响到细胞的培养属性，所以需要封闭。& A6 o, T9 F" L# n6 r
第二，我们通常培养细胞的培养液加有血清，所以一般不再额外添加BSA对包被的fibronectin进行封闭。
* B) D9 T- B# d( O第三，在有些实验，如趋化实验时，因为培养体系中不加血清，这时可以添加BSA进行封闭。

chinajinlei

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