正常滑膜细胞原代培养（转）

细胞海洋

实验材料：7 S0 t% G# O; @
1. 实验动物：大鼠、兔，人手术切除的关节等；
- {/ H. Z' C1 W% y5 i2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2；) x' [  T, A7 D
3. 培养液：RPMI1640培养基，补加15%小牛血清；3 o# J& X0 T( V3 M# R1 {
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实验方法：
7 h2 r0 R& C' I0 t" P4 O6 ~+ k; `1. 将大鼠处死后，用75%酒精消毒；
" T/ t7 K2 q- g2. 用手术剪剖开其四肢皮肤与肌肉，暴露长骨两端的关节，取出关节面滑膜组织置于盛有缓冲液的培养皿中；
: D, ~* d* ^7 p2 U, J. S! r3. 剔除滑膜组织外层结构及周边软骨组织，用缓冲液洗2—3次；! @; q: p# `5 ?+ k
4. 将滑膜组织置于盛有少量小牛血清的培养皿中，剪碎成1mm×1mm×1mm大小的植块；$ Z" K5 ?- p- `! V6 V4 S% x* v/ v" z
5. 将制备的植块接种到螺旋口培养瓶中。反转培养瓶，使植有组织块的一面朝上，加入培养液，盖好瓶盖。将培养瓶放入含5%CO2的培养箱中在37℃条件下进行培养；
, f8 n, D. v) d1 I3 v9 ^3 W6. 培养4h后，组织块较牢黏附于瓶底时，再轻轻反转培养瓶，继续培养；
7 F+ k" g  K/ b; x* h7. 培养3d后换培养液；