紧急求救～mef

wangzhuo822001

铺了mef后，种上mES细胞，将培养基由养成纤维的培养基换成养ES的培养基，没换培养基之前看MEF觉得密度挺大，换液三个小时后看mef细胞间出现了较大空隙，第二天早上看的时候，基本看不到mef了，而且第一次养es，也不知道dish上成团的细胞是不是就是es增殖后的样子。mef细胞应该出现那样的现象吗？？ : u; x1 s) B7 C) V6 G8 m
急救啊～～谢谢～～～
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wangzhuo822001

回复 1# wangzhuo822001 ) c8 M2 ?( D" w' T; w  ^; i2 r7 _
还有就是我用过这样的培养基传代成纤维细胞，高糖DMEM（gibco，含丙酮酸钠、L-谷氨酰胺）添加有15%FSC，1%NEAA和1%青-链霉素，这样的培养基养成纤维细胞都张不起来，而用高糖DMEM（含丙酮酸钠）添加10%FSC、1%青-链霉素就长得很好，为啥啊？？百思不得其解～～～

supergama

建议把图片贴出来。细胞状态肯定不正常：1、MEF状态不好，多少代的MEF？2、有隐形污染，所以当培养条件变好就大爆发了？3、建议不要使用双抗，会掩盖污染。

cortex

这样说来，应该是你MEF老化？再有，MEF之间缝隙增大，可能是贴壁不好？至于你所说的成团细胞，可能是ES，也可能是MEF贴壁不好聚集成团？总之，正于supergama所说，需得看图说话啊！

wangzhuo822001

回复 3# supergama

wangzhuo822001

, Q5 P* O" Y( s0 t- |' N5 K

) Z* I- k, `7 \& ^, i就这样的

wangzhuo822001

回复 3# supergama ! p# K; M6 f9 b& B7 c& L5 Z3 I$ u

$ V2 j1 B9 W/ s$ K3 l3 U, l是用的p3代的细胞上mmc铺成的mef，培养基里面确实是加了双抗～～照片上是看不见mef了吧？里面那些团团的细胞是啥子细胞呢？

supergama

这个细胞没有希望了，个人觉得污染的可能性比较大。
& N$ q# p1 `0 m2 o1 L污染源的可能性MEF>ES>培养液，还是强烈建议不要加双抗。

cortex

你得细胞看起来几乎没贴壁。换成ES培养基后，MEF就飘起来了，个人觉得是可能是ES培养基出问题了（如果你换培养基后没有接种ES）PH值对不对？如果换成ES培养基的同时，解冻传代了ES，这儿存在问题也有可能。再者，培养箱的co2浓度最好测一下，看这个有没有问题。

zpzp0312

重新接种吧
* i' s& t; A5 O  N8 W, A: c% S按楼主培养基的成分看6 ^4 Z# u7 f5 s2 c5 ^3 U
没问题
' x# l$ E6 G$ t. F/ ~# _9 l& _5 B! e# {8 }9 L# J* n& ?. A- F
从图片看，污染的可能大些
7 ~3 y0 i  @1 X7 D( g4 A/ C) ~# _建议再配些溶液! Z  l, k) O$ y3 j- o: z
注意各个环节，应该没问题。或者就是试剂质量本身就不过关
" p) l2 x7 t& X1 \  D5 ~9 I7 C, x! ^( a) f; D
另外，双抗加不加到不是问题。
6 @0 W4 q5 Y% Q都可以长的很好