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查看: 11020\|回复: 3	go [请教] 如何从文库里筛选目标基因 [复制链接]

hndxws

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楼主

发表于 2010-10-14 00:49 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

最近看到有人筛选组蛋白去甲基化酶，听着好像是从买来的库里，把里面的一个一个的基因都加上接头做成克隆，好像是什么大规模筛选之类的。我们这些做小数量克隆的总觉得这个很高深，不理解具体是怎么做的，请教一下专家这些大量的克隆是怎么做出来的，又是怎么鉴定的。谢谢

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hndxws

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沙发

发表于 2010-10-18 11:49 |只看该作者

顶一下问题，求专家指教

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weiyepan

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藤椅

发表于 2010-10-19 12:01 |只看该作者

这个简单：
1. 首先对所需要的目的基因进行分析，设计特异性的两端引物；
2. 用所设计的特异引物对文库进行PCR，把特异条带扩增出来；0 M2 u: O* C# `6 ]8 ?+ J( i
3. 第二步PCR，用预先设计好的接头引物把特异条带加上接头；
4. 用重组或者是经典的方法装到载体里面去；
5. 载体引物测序，确定钓到的是什么基因，然后中间在设计引物，全长测序就是。0 D4 x' [* O6 R/ \/ ?
这个是最基本的流程