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[请教] 如何从文库里筛选目标基因 [复制链接]

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楼主
发表于 2010-10-14 00:49 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
最近看到有人筛选组蛋白去甲基化酶,听着好像是从买来的库里,把里面的一个一个的基因都加上接头做成克隆,好像是什么大规模筛选之类的。我们这些做小数量克隆的总觉得这个很高深,不理解具体是怎么做的,请教一下专家这些大量的克隆是怎么做出来的,又是怎么鉴定的。谢谢
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沙发
发表于 2010-10-18 11:49 |只看该作者
顶一下问题,求专家指教

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藤椅
发表于 2010-10-19 12:01 |只看该作者
这个简单:
: x8 {, \/ Y" q6 R1. 首先对所需要的目的基因进行分析,设计特异性的两端引物;
2 s9 t) L3 E7 j8 ?8 c) ?2. 用所设计的特异引物对文库进行PCR,把特异条带扩增出来;0 M2 u: O* C# `6 ]8 ?+ J( i
3. 第二步PCR,用预先设计好的接头引物把特异条带加上接头;
4 Z3 n" N& h& n: i% |+ `5 M4. 用重组或者是经典的方法装到载体里面去;
8 b1 R3 E2 w8 S' i+ @' y/ y1 U3 F5. 载体引物测序,确定钓到的是什么基因,然后中间在设计引物,全长测序就是。0 D4 x' [* O6 R/ \/ ?
这个是最基本的流程
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板凳
发表于 2010-10-19 20:10 |只看该作者
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基本步骤就是分析目的基因片段,设计引物,然后通过PCR扩增技术获取大量目的片段,再植入特定的载体,经和载体的进一步分析组合后进一步分离,测序目的片段基因序列。。。
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