如何从文库里筛选目标基因

hndxws

最近看到有人筛选组蛋白去甲基化酶，听着好像是从买来的库里，把里面的一个一个的基因都加上接头做成克隆，好像是什么大规模筛选之类的。我们这些做小数量克隆的总觉得这个很高深，不理解具体是怎么做的，请教一下专家这些大量的克隆是怎么做出来的，又是怎么鉴定的。谢谢

hndxws

顶一下问题，求专家指教

weiyepan

这个简单：& ?# b. i! F* ~4 B" f1 E: Q
1. 首先对所需要的目的基因进行分析，设计特异性的两端引物；+ h- p6 ]8 I: G; b5 ]
2. 用所设计的特异引物对文库进行PCR，把特异条带扩增出来；
2 K+ W+ f( U; s. |1 b3. 第二步PCR，用预先设计好的接头引物把特异条带加上接头；
4 p& t$ [* n3 E  `8 P' q4. 用重组或者是经典的方法装到载体里面去；3 {2 {+ }8 |) l6 t4 _0 L
5. 载体引物测序，确定钓到的是什么基因，然后中间在设计引物，全长测序就是。) ]7 H8 T! w# m; V- S; l2 ?; p$ Y6 S
这个是最基本的流程

djj01

基本步骤就是分析目的基因片段，设计引物，然后通过PCR扩增技术获取大量目的片段，再植入特定的载体，经和载体的进一步分析组合后进一步分离，测序目的片段基因序列。。。