如何从文库里筛选目标基因

hndxws

最近看到有人筛选组蛋白去甲基化酶，听着好像是从买来的库里，把里面的一个一个的基因都加上接头做成克隆，好像是什么大规模筛选之类的。我们这些做小数量克隆的总觉得这个很高深，不理解具体是怎么做的，请教一下专家这些大量的克隆是怎么做出来的，又是怎么鉴定的。谢谢

hndxws

顶一下问题，求专家指教

weiyepan

这个简单：5 ?* X0 F9 u9 q, N3 ~1 w; G
1. 首先对所需要的目的基因进行分析，设计特异性的两端引物；' `1 v2 E6 l' H0 h7 ]. Q
2. 用所设计的特异引物对文库进行PCR，把特异条带扩增出来；5 q3 d! V) Q# y4 x
3. 第二步PCR，用预先设计好的接头引物把特异条带加上接头；9 S6 |9 @1 X* b$ b' r" Y( |1 O
4. 用重组或者是经典的方法装到载体里面去；
1 ?8 u4 G4 r4 ^1 t" M1 x% l5. 载体引物测序，确定钓到的是什么基因，然后中间在设计引物，全长测序就是。: t: Q5 U# [3 T" D3 v$ s$ S# e6 \
这个是最基本的流程

djj01

基本步骤就是分析目的基因片段，设计引物，然后通过PCR扩增技术获取大量目的片段，再植入特定的载体，经和载体的进一步分析组合后进一步分离，测序目的片段基因序列。。。