如何从文库里筛选目标基因 - 实验室综合讨论区干细胞之家

干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 › 干细胞之家论坛 › 干细胞实验室技术交流 › 实验室综合讨论区 › 如何从文库里筛选目标基因



免疫细胞治疗专区	欢迎关注干细胞微信公众号

返回列表

查看: 10976\|回复: 3	go [请教] 如何从文库里筛选目标基因 [复制链接]

hndxws

高级会员

Rank: 4

积分: 1006
威望: 1006
包包: 3851

金话筒优秀会员

楼主

发表于 2010-10-14 00:49 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

最近看到有人筛选组蛋白去甲基化酶，听着好像是从买来的库里，把里面的一个一个的基因都加上接头做成克隆，好像是什么大规模筛选之类的。我们这些做小数量克隆的总觉得这个很高深，不理解具体是怎么做的，请教一下专家这些大量的克隆是怎么做出来的，又是怎么鉴定的。谢谢

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 2	+ 5	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2 包包 + 5 查看全部评分

收藏0 分享0 顶0 踩0

回复引用

举报返回顶部

hndxws

高级会员

Rank: 4

积分: 1006
威望: 1006
包包: 3851

金话筒优秀会员

沙发

发表于 2010-10-18 11:49 |只看该作者

顶一下问题，求专家指教

回复引用

举报返回顶部

weiyepan

高级会员

Rank: 4

积分: 1903
威望: 1903
包包: 6126

金话筒优秀会员

藤椅

发表于 2010-10-19 12:01 |只看该作者

这个简单：
1. 首先对所需要的目的基因进行分析，设计特异性的两端引物；' v! z. ]8 d6 m6 r
2. 用所设计的特异引物对文库进行PCR，把特异条带扩增出来；, t: }+ Q3 ~0 \+ R1 M0 @
3. 第二步PCR，用预先设计好的接头引物把特异条带加上接头；" y& g4 @$ h6 D, J4 M
4. 用重组或者是经典的方法装到载体里面去；# R. n$ ~6 S2 {( ~
5. 载体引物测序，确定钓到的是什么基因，然后中间在设计引物，全长测序就是。2 m6 p, Y5 }/ D2 C, i7 c
这个是最基本的流程