EB后消化吹打成单细胞有什么技巧？

erikoapril

感觉种EB后的mESC非常容易成团，很难消化吹打成单个细胞，
5 `1 S! ^: a' }0 Q请问各位高手们有没有什么好的方法经验？
8 l- z% ~4 B+ L1 g4 n8 c! e# Y比如用胰酶消化的时间和吹打的次数、力度？

juan880929

为什么要吹打成单细胞呢，分化基因的检测一般是整个做切片啊

fish_zbw1985

回复 2# juan880929
6 B. V; s6 o( V4 G3 K/ H做流式检测应该需要消化的，发现用胰蛋白酶消化很容易将细胞消成絮状物

wjmkg

回复 1# erikoapril
! ~6 {) i8 K0 ]5 N4 p; b8 P3 ]. h% \$ @5 `
6 m$ s0 d  _5 ]+ D2 `0 V( p* {
   可试试 先用胰酶消化一下，弃去胰酶，再加胰酶消化后用血清终止反应后吹打一百次左右

wjmkg

回复 3# fish_zbw1985 5 t' l5 J3 J: F( v3 q

/ D+ s% H' P$ m
6 Q$ g- t9 x: c, S' L    你消化的时间有点长了

fish_zbw1985

我用0.05%胰蛋白酶消化5min，然后终止吹打，大团块有时候就容易消不均匀

erikoapril

以上的方法都试过了，效果依然不是很好。。。