关于细胞冻存的一个问题，不知大家平时有没有留心过？标题留长一些，欢迎大家热烈讨论

deron

昨天犯了一个很严重的错误，在分离出血液的单个核细胞以后，装入冻存管中放进4℃冰箱，结果忘记放入-80℃冰箱，直到今天早上整理试剂时才发现，这时已经过了18h。此时冻存管中的细胞已经沉到底部，冻存液中也有类似溶血的现象出现。
+ g# @8 k  T& J: f  Y) ?7 D想请教大家，这样的细胞活性还会有多少？% x7 n+ S" c  g0 z  R
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今天早上上网查阅了相关资料，发现在冻存的4℃平衡这一步，大致有：) q1 y0 W- L) R, J* J# X- ^" j
1.4℃平衡半小时，投入-80℃冰箱
1 _6 i, ^! M3 a9 }4 x2.直接用冷的冻存液悬浮细胞，投入-80℃冰箱* J, O) j1 M2 S0 h
3.4℃、-20℃、-80℃……不赘述: N. q& `, P, m$ h5 A
4.4℃过夜，投入-80℃; [- p. C4 `2 W  F
5.程控降温仪……不赘述( v$ H* u4 _+ z0 z# e
看到第四种方法时我差点没跳起来，敢情这就叫歪打正着误打误撞？过一段时间细胞复苏的时候用台盼蓝染色检测一下细胞活性，届时把结果发回来。

wjmkg

这样做应该是可以的

wjmkg

这样做应该是可以的

daviddow

上次我也是这样，放在-4°忘了，后来直接离心，清洗，细胞都没有存活。我分析的原因是：在-4°细胞依然处于存活状态，这是由DMSO，细胞毒性大，所以细胞都死了。

267318024

学习下，还不知道呢！

djj01

我想需要再次验证反复验证，偶然的事件往往多次验证才成为科学吧。。。也有可能-4°过夜只是一个必需条件，是不是还夹杂了其他的原因？有待探讨。。。

djj01

我想需要再次验证反复验证，偶然的事件往往多次验证才成为科学吧。。。也有装入冻存管中放进4℃冰箱再放入-80℃冰箱只是一个必需条件，是不是还夹杂了其他的原因？有待探讨。。。，

djj01

我想需要再次验证反复验证，偶然的事件往往多次验证才成为科学吧。。。也有装入冻存管中放进4℃冰箱再放入-80℃冰箱只是一个必需条件，是不是还夹杂了其他的原因？有待探讨。。。，

sfk06

估计会有部分存活，但可能会有大部分细胞死亡。DMSO可能会破坏细胞膜

haibara007007

估计活性不会很高
& I# a7 C/ C" J( v3 L3 Z5 l# I. h等待楼主的结果