有关克隆形成率的问题 - 实验室综合讨论区干细胞之家



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zhaoyan1983

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楼主

发表于 2010-10-15 20:46 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

“将消化的ES按每孔100个细胞接种到铺有饲养层的6孔板中，经吉姆萨染色鉴定克隆”。这是文献上的步骤！
但是这100个细胞（当然不一定非要这么准确！）里应该还含有MEF吧，这样的话应该如何统计克隆率？我的意思是说，压根儿就分不清每个孔里大概有多少ES，那最后应怎样统计克隆率

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沙发

发表于 2010-10-15 23:07 |只看该作者

100个细胞当然不含有MEF，ES先要纯化再做克隆形成率。

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zhaoyan1983

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藤椅

发表于 2010-10-15 23:32 |只看该作者

回复 2# supergama

请问要如何纯化才能保证一点不含MEF？

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supergama

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板凳

发表于 2010-10-16 06:36 |只看该作者

差数贴壁和密度梯度离心都可以。

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xyzxxx

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报纸

发表于 2010-10-16 07:50 |只看该作者

如果樓主提的是小鼠ES細胞的話+ |# h$ T$ I6 M2 [: N
ESC看起來非常小非常圓
而MEF則大很多而且會成梭狀或不規則胞突 x9 Z6 z5 I' `
大多數情況下可以輕易分辨出來* {7 z0 ?$ V, b4 z$ d. k( r& n5 y
; t' s! L+ {% ]6 k- c
除此之外長滿後ESC會比MEF相對多很多所以計算上影響不大