请教骨髓间充质干细胞培养老化的问题~~（附图）

cc1986

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密度梯度离心法分离人骨髓间充质干细胞，培养基 低糖DMEM+10%胎牛血清（进口）- L# a* s$ }! _6 H
培养3代后基本每批分离的细胞都会出现以下情况：
! ]9 Y0 m9 u9 K- e2 ^1 l9 t% I' ~1.部分细胞扁平，个头变大，个别还呈多角形  2.背景变脏，培养基里出现大量细小黑颗粒，培养基颜色清凉 ，对细胞生长未见明显影响。4 ~+ D- R2 o( F! K, i# w. K
请教过一些人，说是老化现象，但是才3代就老化是不是不太可能~~
/ u* w$ G) D+ p& k- }附图如下：

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不想是污染，有点像细胞碎片，你是密度梯度离心培养的，这个方法由于离心次数过多，对细胞可能造成损害，导致了提前的老化，个人意见！

illidancui

这个问题已经半年了，各种改进都做了，一直没办法呃。坐等高手解答。倾向于密度原因。

dongleizhang

你可换过培养基？换种试试吧df12，另外你直接用全髓的试一下，双抗和谷氨酰胺用了没？

shiqingxi

自体的就是容易老化，我养的一般两三代后就老了

shiqingxi

脐带的活性好的多

chuanbaozang

可以加一点生长因子，比如FGF、VEGF等，
4 ^! z: c4 A; a+ j) }不是高浓度血清也可导致其老化嘛，如果可以，降低一下血清浓度试试，或许会好些

luoziwei

MSC的特性具有个体、组织来源差异性，有3代就老化的，我觉得还是培养基的问题，换个试试嘛

morning860

请问你取材个体的年龄是多少？好像个体年龄大也会有一定的影响的。如果出现老化，可以考虑加一些非必须氨基酸（进口），加之后效果不错。

morning860

接种密度低干细胞也容易出现老化，长不起来的现象，另外胰酶消化时间对BMSC影响也挺大。