肿瘤干细胞的克隆实验需要注意哪些问题 - 肿瘤干细胞专区干细胞之家



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billywang007

新手上路

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楼主

发表于 2010-10-22 09:25 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

我做肿瘤干细胞，原代培养已经看到肿瘤细胞球，而且长势很好，现在想做克隆实验，即向把细胞球吹散，在96孔板上做单克隆，请问各位前辈，在这个实验过程中有什么需要注意的地方吗？谢谢！

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帅哥研究员

沙发

发表于 2010-10-24 14:41 |只看该作者

本人感觉，操作要小心，我们实验室有好几个在做克隆实验时都遇到过污染。

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coldage

新手上路

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藤椅

发表于 2010-11-8 15:20 |只看该作者

我觉得肿瘤干细胞很难吹散的，你做单克隆必须要单细胞才行，要不然肯定会有很大的差异，得到的不是单克隆生长出的细胞

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qianbaobiele

新手上路

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板凳

发表于 2010-11-16 23:07 |只看该作者

回复 1# billywang007 5 X# S. A& n" O0 b- c$ `- W

你好，我也准备做悬浮培养，请问你做这个实验生长因子一共用了多少？主要是考虑费用的问题，谢谢

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龙之吻

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报纸

发表于 2010-12-29 20:38 |只看该作者

你的先把干细胞球消化成单细胞，在做单克隆，10个/ml，每孔加100ul

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gandanxiaoyang

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优秀会员

地板

发表于 2010-12-30 10:09 |只看该作者

做这种肿瘤干细胞克隆实验类似于悬浮状态下的Sphere形成实验，关键是看用什么培养条件。根据我们的经验，可以用含血清的培养基，也可以用不含血清仅加入若干生长因子（例如EGF，bFGF等），都可以观察到Sphere的形成。这种Sphere应该有连续传代的能力。传代时可以加入胰酶，吹散后继续种入培养板中。用ULA的低粘附板会比较方便，我们通常都是用低粘附下的悬浮生长来观察Sphere的形成效率。呵呵，既然是做细胞培养，污染当然是要绝对避免的！