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to cc1986:
/ W1 ?, w8 q1 ^2 f! Y8 d9 `$ F: z/ q7 y2 J! j8 G7 y, ^2 v
协同表达 指通过IRES将目的蛋白的基因和EGFP基因 连在一起,构成双顺反子。0 v f, @: l+ f4 Q, |
$ s. s! v$ s( b7 R% h$ Y
转录的时候,目的基因和EGFP会被转录在一条mRNA上。但是翻译的时候,会翻译成两条多肽链。目的基因的翻译是从mRNA的5`端开始,而EGFP的翻译是核糖体结合在IRES上开始的。2 {- u3 @% {. I. r
8 I8 k" U, J1 Z' G. E
协同表达的优点:不影响目的蛋白的功能! N7 P8 J, R1 [3 S. k" F
缺点:EGFP不能反应目的蛋白在细胞内的定位
# C) C5 a/ P5 d EGFP和目的蛋白的表达不是1:1,所以EGFP会比融合表达的弱& d3 V- H8 E, T. ?# I
$ O0 \ h) o. n7 y 融合表达 根据位置不同,分为N端融合 和 C端融合,但无论是那种目的基因和EGFP都会成为一个ORF。因此翻译后是一个融合蛋白。EGFP融合后会不会影响目的蛋白的生物学特性,要看目的蛋白本身。如果EGFP不影响目的蛋白的构象,那可能对目的蛋白的功能不会有太大的影响。如果你想知道你的目的蛋白有没有可能被影响,可以多看看文献。我发现高因子的文献里会N端和C端融合各做一个。) S& F% G- J- O1 c
, R& G h1 K% u$ @, x9 R6 _ 融合表达的优点: EGFP亮度比协同表达亮
3 b0 M& V3 i4 E2 c" \ 能反映目的蛋白的细胞内定位
- S c( x7 {, K3 o p1 s2 D7 r# S3 c9 f" {- A s% ~ ~# J
缺点: 可能会影响目的蛋白的功能 |
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