内皮组细胞的培养

新手

我准备做内皮祖细胞的培养，以前无这方面的经验，想请教一下外周血经过密度梯度离心后，标本是不是被污染了，那接下来的培养怎么做呀？

dongleizhang

放离心管里 在超净台里包上parafilm再拿出来离心就好了，离心过后在超净台里吸取单个核细胞层

bridgeyangfan

内皮细胞培养以人脐带静脉灌流消化法最例，其法如下：
. e0 B: q: h% ~2 U7 j! z& Q* |1、产后新鲜脐带，无菌剪取10—15厘米长一段，如不能立即培养，可于12小时内保存于4℃。
% _4 m8 X# x1 W8 i2、用三通注射器吸取温PBS液注入脐静脉中洗去残血，在入口处用线绳扎紧，以防液体返流。 3 Q# @1 @: ]4 P7 G
3、用血管钳夹紧脐带一端，从另一端向脐静脉中徐徐注入终浓度为0.1%的粗制胶原酶，充满血管，消化3—10分钟；注入口用线绳扎，以防液体返流。
4 l0 W5 K5 y& M2 c  n7 z4、吸出含有内皮细胞的消化液，于离心管中，注入温PBS轻轻反复冲洗后，一并注入离心管中（此步骤可重复）。
6 C* O1 K% b+ J/ ~* M5、离心去上清，加入RPMI1640培养液制成细胞悬液，接种入培养器皿中，置温箱培养。两至三天可见细胞长成单层。 ! L/ X; ?$ d4 R" ?7 E
此方法仅作参看

新手

回复 2# dongleizhang
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! p/ @* H+ N& l0 E( [$ h! O. [# N' X: @+ F2 O" ?  p, I
    我们这里密度梯度离心在单独的实验室里，离心过后必须在另外的实验室超净工作台进行后续的培养，所以实验室的管理员说这样肯定要污染，我以前也没做过细胞培养，所以有些模糊。

dongleizhang

回复 4# 新手 + _6 n; b8 o+ Y/ B/ Z& Y

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4 F2 P/ V. K2 d" w- D% z    所以才让你包上再拿出来的啊，那个本身就是为了保护标本出了超净台不被污染才用的，我们有两个细胞室，有一间屋子的离心机不好用，就会转到另一间去密度梯度离心，不过拿回来也没见污染，这个没有多大机会污染的，放心吧

新手

回复 5# dongleizhang 3 [( ]; e. N6 ?, ~; W7 S

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+ W: v4 c( P  T    谢谢你呀！

chinajinlei

没有关系的，离心时候拧好盖子。离心后用酒精棉擦拭管口，小心一些就行

xiaodiao123

我们实验室直接把装满液体的离心管拿出来离心，当然我们用的离心管都是一次性的并且灭菌很彻底。还有离心机一直在实验室里面，我们照紫外的时候一般会照空间的紫外。所以这样一般是没有什么问题的

我爱光明2009

以上方法已经很全面了，我就不补充了！！