请教：磁珠分选中的疑惑

mckf111

目的：分人卵巢癌干细胞' B" T. {* X2 N9 h3 |+ V9 Q7 d
方法：利用CD44+和CD117+双阳磁珠分选
3 I3 W/ G7 Y, j/ i( v1 e- L奇怪的是 利用CD44+初筛后被粘住的细胞有3% 在洗脱之后 利用这3%做双阳性时 却只剩下了万分之一 照理说 那些CD44+的细胞应该还是会全部被粘住啊 应该还是3%左右才对 咋的就只剩了万分之一呢5 S8 }, \6 s& R2 }: s# N# l$ I' u
不知谁能解我疑惑。。。

leisong12

1.磁珠分选初筛的纯度本身有无问题，上流式检验了没有？/ z1 U/ l5 `: [5 a; Y
2.既然CD44＋可以用磁珠分选，为什么不把两种抗体同时标上再用磁珠分选，这样保证CD44都能留下来，除非你的“应该还是3％左右才对”这句话本身立不住脚，也就是说双阳性细胞要比CD44＋细胞少的多，这样的化，万分之一的结果也是有可能的啊！

mckf111

回复 2# leisong12 * A3 ?$ }7 v/ d- K! x/ G, A
1、流式检测出双阳是3% 2 `" l+ d( m4 L
2、您还没听懂我的问题 就是如果我想分A+B+的细胞 第一种方法 我可以用双阳抗体一次分出来 而第二种方法 我也可以分两步去分出来 先筛出A+细胞 再把A+细胞过B+抗体分选 两种方法得到的细胞数应该大体相当
# Q  [% ~  y$ v( b  Y而我这次是采用另一种方法 就是先筛出A+细胞 再把它们通过双阳抗体筛选 照理说 得到的应该和A+细胞数量相同才是 因为A+B+中毕竟还是有A+抗体 那么第一次的A+细胞还是照样被全部吸附住 不会被洗脱下来 管他B+有没有 但是实验结果却是从3%降至万分之一 我想不通啊

amosummer

是不是和分离的方法有关系，其实有时候我也担心同样的问题，到底分离下来的细胞是不是想要的细胞，还是只是细胞比较小，或是其他的原因恰巧被分离下来了，而不是因为表面抗体的原因，所以分离下来可以检测一下阳性细胞表面抗体表达的情况。