神经干细胞鉴定

平平淡淡

我做细胞免疫荧光鉴定nestin，先用4%甲醛固定，再用0.2%tritonX-100透化5分钟，然后封闭孵一抗二抗，最后封片在荧光显微镜下看，为什么细胞碎片很多，基本上看不到完整细胞形态了，是不是透化过了头破坏细胞膜了？应该如何透化？？？

dulaiyouyu

固定和透化的 浓度都没有问题的。会不会是漂洗的时候太不小心，细胞被冲掉了呢？只有一些碎片残留？

beidouhan

一抗有孵育4度过夜吗，做之前最好控制好细胞代数

痞子的烟头

确保先前细胞状态不错，其它只要小心点就可以了，注意PBS洗的时候要轻点，

jhu132llh

是不是细胞爬片爬的不结实，然后再洗涤的过程就细胞被洗去了，就剩下细胞碎片了；
5 b. g; k% r2 I8 l不过，应该细胞碎片也不会很多，
4 ^; Y+ }- ^; t1.你的甲醛是用什么配的，PBS还是神马？注意从固定到染色一系列过程中所有溶液的渗透压了吗？2 w. s+ B, ?1 g6 _8 D# d* E
2.0.2&的tritonX-100，5分钟对细胞也算不上什么大的伤害，我们也曾经做过，没问题的。考虑一下是不是洗的有点过了。

平平淡淡

谢谢各位帮助。我的甲醛是用PBS配的，一抗也孵育过夜了。哪位能把您的具体步骤告诉我呢。