细胞冻存与复苏

皮搋子

冻存：选择细胞状态最好时冻存，冻存液10%DMSO，30%血清，60%培养液，最好是配好了放于4度，待温度降为4度后再用于重悬细胞。而后用包布包好，放于-20冰箱2h，再-80过夜，从包布中取出放于液氮中。* ?" ?3 B: ], M* a- M) P. O% }" |
      这样能够保证细胞有较高的存活率。8 O+ K  B& H0 w) D7 M! H3 z3 n
      
% ~. w' {( [2 t6 h( U      复苏：准备好37-40度水浴，将细胞从液氮中取出，迅速置于水浴中不断晃动，待全部融化后取出，准备一支离心管加2-3ml培养液，将细胞加入混匀后1000rpm离心5min，弃上清，完全培养液重悬。
5 i$ g) N: U3 O5 e+ I3 Q     这样操作对复苏细胞来说条件比较温和。
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      希望对刚开始学习养细胞的朋友有帮助！！

xuehu20

我们实验室在复苏细胞时一般为：水浴锅中不断摇晃，待冻存管中冰块颠倒时能滑下来时，迅速消毒置于超净台中，提前准备一支15ml离心管加入10ml4度预冷的培养液，将细胞加入混匀后1800rpm离心10min，弃上清，完全培养液重悬

清影

楼上说的很详细，只是离心速度有些大吧，在1000-1200rpm下离心10min。确保速度快和冻存管的密封良好

lipd09@mails

我感觉应该是用10~20ml的培养液做为稀释液吧。

流云阿凯

我们实验室的冻存液的配方是培养基：血清：DMSO=7:2:1，经过长期的实验效果也是不错的，大家可以试一下啊！

黑眼豆豆

sigam产品推荐的是 7：2：1

andyz0922

如果在复苏时候  不用离心  直接接种到20%FBS 培养基里  第二天换液可以吗？

心灵旅者

懵懂干细胞

复苏会遇到小爆破！注意注意！！！

liujucool

放液氮时拧不紧  复苏时容易爆炸  很危险
7 g9 N! d, f; ~. r9 V+ f  x( z% b  我们实验用的冻存液是DMSO：FBS=1:9的比例 细胞冻存了 还没有复苏过  不知道这样对细胞存活率影响大不大