|
  
- 积分
- 8
- 威望
- 8
- 包包
- 898
|
作者：雷俊霞， 郭振宇， 赵东长， 温冠媚， 张秀明， 郑 芹， 李树浓， 项 鹏作者单位：中山大学 １． 中山医学院病理生理教研室， ２． 附属第五医院器官移植科， ３． 干细胞中心， 广东 广州４． 广东省妇幼保健院儿科， 广东 广州５． 广州医学院病生教研室， 广东 广州
' ]' M0 [! \/ c5 k
2 R* ^' O3 A7 K, R
4 N% ]; S7 N, j# i( E3 b$ }' _ , `. e' U, a9 t) _
( |) P. s+ N; B0 a
' F7 y/ @0 N- l% e% K! e" p; ^/ ?( G
0 s$ S7 Q D" e" e$ f; M z& |. c 5 f; n$ e, M) `7 o6 w2 J' ^
( Y8 J) V; H' E
/ }. E' u" _# b. E
3 v& C& R. X6 G
: q/ |9 T* C3 V* O1 f' n/ [, x 【摘要】 【目的】 探讨骨髓间质干细胞（ＭＳＣ）对同种大鼠骨髓移植后移植物抗宿主反应（ＧＶＨＤ）的影响，尤其是ＭＳＣ对脾脏结构重建的作用。【方法】 建立Ｆｉｓｃｈｅｒ３４４ （ＲＴ-１Ａｌ） 大鼠至 Ｗｉｓｔａｒ（ＲＴ-１Ａｕ）大鼠的同种异体骨髓移植模型，观察移植后大鼠的基本生活情况，病理学分析靶器官皮肤、肝脏、肠道和脾脏的组织学改变，尤其注意ＭＳＣ对同种骨髓移植后脾脏结构重建的影响。【结果】 ①在移植后３０ ｄ的观察期内，共移植组显示较高的生存率。②组织学分析显示：在共移植组，靶器官皮肤、肝脏、肠道的损伤相对较轻。③脾脏组织学分析显示：在骨髓与ＭＳＣ共移植组，受体脾脏结构接近正常；在单纯骨髓移植组，受体脾脏白髓萎缩，动脉周围淋巴鞘只有少量Ｔ细胞，无典型脾小结形成。【结论】 ＭＳＣ与骨髓共移植对ＧＶＨＤ有抑制作用，并显著促进脾脏结构重建。
- t* b! Y* ^+ c. q; [ 【关键词】间质干细胞； 骨髓移植； 移植物抗宿主； 脾脏! i- _( `3 z2 P" q
Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｒａｔ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｃｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ ｔｏ Ｓｅｖｅｒｉｔｙ ｏｆ Ｇｒａｆｔ ｖｓ Ｈｏｓｔ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｓｐｌｅｎｉｃ Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ
; x: W( |6 q p; V+ |( O+ t+ I( r' _$ K0 [( T* u1 H
ＬＥＩ Ｊｕｎ-ｘｉａ１，３， ＧＵＯ Ｚｈｅｎ-ｙｕ２， ＺＨＡＯ Ｄｏｎｇ-ｃｈａｎｇ４， ＷＥＮ Ｇｕａｎ-ｍｅｉ５， ＺＨＡＮＧ Ｘｉｕ-ｍｉｎｇ３，* @) ]" s8 o2 B- Q/ \9 J
4 | x) {1 t1 q6 J4 m7 X8 SＺＨＥＮＧ Ｑｉｎ１，ＬＩ Ｓｈｕ-ｎｏｎｇ３， ＸＩＡＮＧ Ｐｅｎｇ３- |7 w6 `) |: P7 H: |8 ?. v
9 a. M" o; d* A
（ １． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ， Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， ＳＵＮ Ｙａｔ-ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１００８０， Ｃｈｉｎａ； ２． Ｔｈｅ Ｆｉｆｔｈ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ ＳＵＮ Ｙａｔ-ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｚｈｕｈａｉ ５１９０００， Ｃｈｉｎａ； ３． Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｓｔｅｍ3 a0 o, m) {/ `
3 R. p% t+ R, K0 T8 c+ _, t+ Q& uＣｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， ＳＵＮ Ｙａｔ-ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１００８０， Ｃｈｉｎａ； ４． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ
( A& V; t9 Z, y
5 x0 ~+ Q: z& i+ p+ a) SＰｅｄｉａｔｒｉｃｓ， Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ Ｍａｔｅｒｎａｌ ａｎｄ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ′ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１００１０， Ｃｈｉｎａ； ５． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ# F5 \5 Q; M+ m1 T- D" H8 S: E7 S* I
# Y8 M$ x* Q K% v5 f5 |- lｏｆ Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０１２０， Ｃｈｉｎａ ）
1 o) g, s, D) ^% B1 R k. ?3 l# O% q5 R# c e7 g; o
Ａｂｓｔｒａｃｔ： 【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】 Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ （ＭＳＣ） ｏｎ ｓｅｖｅｒｉｔｙ ｏｆ ｇｒａｆｔ ｖｓ ｈｏｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ （ＧＶＨＤ） ａｆｔｅｒ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ （ａｌｌｏ-ＢＭＴ）， ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｏｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ ｏｆ ｓｐｌｅｅｎ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｋｎｏｗｎ ａｓ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｉｍｍｕｎｅ ｏｒｇａｎ ａｎｄ ｔｈｅ ＧＶＨＤ ｔａｒｇｅｔ ｏｒｇａｎ． 【Ｍｅｔｈｏｄ】 ＢＭＴ ｍｏｄｅｌ ｆｒｏｍ Ｆｉｓｃｈｅｒ３４４ ｒａｔｓ （ＲＴ-１Ａｌ） ｔｏ Ｗｉｓｔａｒ ｒａｔｓ （ＲＴ-１Ａｕ） ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ． Ｔｈｅ ｒａｔｓ?蒺 ｂａｓｉｃ ｌｉｖｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｔａｒｇｅｔ ｏｒｇａｎｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｔｈｅ ｓｋｉｎ， ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｒａｃｔ， ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｔｈｅ ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｌｅｎｉｃ ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ． 【Ｒｅｓｕｌｔｓ】 Ｉｔ ｗａｓ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｈａｄ ａ ｈｉｇｈｅｒ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ａｔ ３０ ｄａｙｓ ｐｏｓｔｒａｎｓｐｌａｎｔ． Ｔｈｅ ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｋｉｎ， ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ， ａｎｄ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｒａｃｔ ｉｎ ｃｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｄａｍａｇｅｄ ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ ｓｌｉｇｈｔｌｙ． Ｂｙ ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ， ｔｈｅ ｓｐｌｅｅｎｓ ｆｒｏｍ ｃｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ａｐｐｅａｒｅｄ ｎｅａｒｌｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｎｏｒｍａｌ， ｗｉｔｈ ｗｅｌｌ-ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｒｅｄ ａｎｄ ｗｈｉｔｅ ｐｕｌｐ； ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｓｐｌｅｅｎｓ ｆｒｏｍ ＢＭ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ａｔｒｏｐｈｉｃ， ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｌｅｓｓ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒｍｉｎｇ ｐｅｒｉａｒｔｅｒｉｏｌａｒ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｓｈｅａｔｈｓ （ＰＡＬＳ）， ｗｉｔｈｏｕｔ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｆｏｌｌｉｃｌｅｓ． 【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ】 Ｃｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ＭＳＣ ａｎｄ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｃｏｕｌｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ＧＶＨＤ， ａｎｄ ｒｅｍａｒｋａｂｌｙ ｐｒｏｍｏｔｅ ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｌｅｎｉｃ ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ．
. S# C$ ^4 E" f' }! m
/ Z0 K: j8 H/ I0 j0 e# X# UＫｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ； ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ； ＧＶＨＤ； ｓｐｌｅｅｎ
& m6 T6 j2 s5 t. ]0 Q: d+ k
1 N2 D0 Z) D4 p4 l9 V3 Y& m* O［Ｊ ＳＵＮ Ｙａｔ-ｓｅｎ Ｕｎｉｖ（Ｍｅｄ Ｓｃｉ），２００８，２９（６）：６８０－６８３，７１５］
, e3 R+ n" x& a2 h
2 V8 F1 p( ?& a9 R1 k6 h骨髓间质干细胞（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ， ＭＳＣ）具有明显的造血支持作用以及多向分化潜能［１－５］。近来ＭＳＣ还被发现具有突出的免疫调节作用。ＭＳＣ低表达ＭＨＣ-Ｉ类分子，通常不表达ＭＨＣ-ＩＩ类分子，不表达共刺激分子以及不能激发同种淋巴细胞的增殖反应，因此ＭＳＣ被认为具有低免疫原性，这一特点使ＭＳＣ的应用可能跨越“同种障碍”变得更为广泛。此外ＭＳＣ还具有特殊的免疫调节效应，体外实验表明ＭＳＣ可抑制丝裂原和同种抗原诱导的Ｔ细胞增殖，而且这种抑制不受ＭＳＣ、刺激细胞和反应细胞之间的ＭＨＣ限制；抑制专职抗原递呈细胞的成熟以及功能发挥；抑制Ｂ细胞的增殖和趋化作用；抑制静止状态ＮＫ细胞的活化增殖，而对激活的ＮＫ细胞的抑制相对较弱［６，７］。但是同大量详尽的ＭＳＣ体外研究相比，ＭＳＣ的体内免疫调节机制并未阐明，部分Ｉ 期临床虽然提示ＭＳＣ可促进造血重建并抑制ＧＶＨＤ，但毕竟仅限于个别病例报道和有限的资料分析［６－１１］，而且有的报道也未明确ＭＳＣ的治疗意义［１２］，可见ＭＳＣ治疗效果不稳定且临床没有足够的指标可以对此作出解释，ＭＳＣ能否在临床推广应用，如何制定安全有效的治疗方案，促使我们必须对其体内免疫调节机制进一步探讨。在前期研究中，通过流式细胞术和免疫功能检测，分析发现ＭＳＣ促进同种骨髓移植后免疫功能恢复。由于脾脏作为重要的外周免疫器官和ＧＶＨＤ攻击的靶器官，本研究则进一步分析ＭＳＣ对骨髓移植后脾脏结构重建的影响。
0 u; t& p! c( r2 o% l0 p' @1 H5 h- L% `/ g+ U$ D
１ 材料与方法
5 T6 R9 W' V M% {4 P: q
' T* n. i6 m0 M2 H- R! ]$ i１．１ 实验动物
7 V% E0 p$ k% E) m! j
& g% f: {9 W9 ]! y$ m- FＦｉｓｃｈｅｒ３４４ （ＲＴ-１Ａｌ）、 Ｗｉｓｔａｒ（ＲＴ-１Ａｕ） 大鼠，６ ～ ８周龄，中山大学药学院实验动物中心提供。
/ v+ {) q# @$ U' i2 y' N; F! j
- V" C8 X3 M4 [! G7 d+ m( L１．２ 试 剂
$ H/ x: z$ s' k% Z' ]& M5 q/ B( E- ^$ P3 [2 z* P8 G9 r
ＤＭＥＭ-ＬＧ（ＧｉｂｃｏＢＲＬ， Ｇｒａｎｄ Ｉｓａｎｄ， ＮＹ），ＧＬＵＴＡＭＡＸ Ｉ （Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ， Ｐａｉｓｌｅｙ， Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇ-ｄｏｍ）， １００ ｍｌ／Ｌ胎牛血清（ＦＣＳ）， １００ Ｕ／ｍＬ 青霉素和 １００ μｇ／ｍＬ链霉素（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）。6 E: q7 h% d3 E: p1 U. Y
5 q7 e- a/ X% m( }' \) b4 @; y9 Q
１．３ ＭＳＣ的分离、扩增及鉴定
" L/ M# ^/ ?: m3 V7 Y! Y* M+ }6 q: R- y) X7 T
按本室常规方法操作［１３］。收获大鼠股骨骨髓，贴壁培养，经反复换液、弃悬浮细胞，待细胞传至第５ 代时，可获得纯的骨髓ＭＳＣｓ。选择Ｐ５ ～ Ｐ１０ 代的细胞，用流式细胞技术分析细胞表面标记并进行成脂、成骨样细胞诱导鉴定。
$ Z' M9 F. a4 O/ g4 Q. o2 R% ]. q# Z' k& p2 x; Q, ?$ G& B
１．４ 大鼠ＭＳＣ对同种异体骨髓移植后ＧＶＨＤ的影响7 g5 P) ?$ l5 P. P6 D. A
! J/ J$ ^+ Z7 d1 v' `
１．４．１ 供者大鼠的骨髓细胞制备 取６ ～ ８周龄Ｆｉｓｃｈｅｒ３４４（Ｆ３４４，ＲＴ-１Ａ１）雄性大鼠，颈椎脱臼处死，无菌条件下取出双侧股骨和腓骨，用注射器吸取ＲＰＭＩ-１６４０培养基冲出骨髓腔中细胞，Ｔｒｉｓ-ＮＨ４Ｃｌ溶解红细胞，台盼蓝染色计算细胞活力和数目，细胞活力应为９５％以上，调节细胞浓度为１ １０８ ／ｍＬ。
; F: {& Y! t3 B2 J7 |/ H/ i* l. u# b! s/ B( C! V5 n& O
１．４．２ 受者大鼠预处理、分组 受者大鼠为体质量１８０ ～ ２００ ｇ的雌性Ｗｉｓｔａｒ（ＲＴ-１Ａｕ）大鼠，移植前３ ｄ开始饮用含庆大霉素（３２０ ｍｇ／Ｌ）和红霉素（２５０ ｍｇ／Ｌ）的饮用水。移植当天采用６０Ｃｏγ射线全身照射法进行预处理。照射剂量为８．５ Ｇｙ，剂量率为０．７ Ｇｙ／ｍｉｎ。照射后６ ｈ内，经腹股沟静脉移植供体ＭＳＣ（５ １０６）和／或骨髓细胞（０．８ １０８）。分组如下：Ａ组（单纯骨髓移植组），每只大鼠移植０．８ １０８个骨髓细胞；Ｂ组（ＢＭ与ＭＳＣ共移植组），每只大鼠移植（０．８ １０８个骨髓细胞 ＋ ５ １０６个ＭＳＣ）；Ｃ组（单纯照射组），预处理后不移植细胞，在股静脉注射等量的生理盐水。每组１０只大鼠，移植后３０ ｄ取材。; K) i, k* w$ P3 H: Q1 A* ]" n
" S# v8 `" c- M/ F
１．４．３ ＭＳＣ与骨髓共移植对ＧＶＨＤ的影响 每日观察大鼠的活动、饮食、大小便、皮毛等情况。移植后３０ ｄ 取大鼠的皮肤、肝脏、脾脏、肠，４０ ｇ／Ｌ多聚甲醛固定后，常规切片，ＨＥ染色， 观察其组织学病理改变。ＧＶＨＤ 的病理表现及评分标准：①肠道，单个腺泡细胞坏死，固有层炎症细胞浸润，甚至整个腺泡缺失，最严重的为表皮剥脱；②肝脏，汇管区淋巴细胞浸润，胆管上皮细胞凋亡，脉管内皮炎，实质细胞凋亡；③皮肤，基底细胞空泡变性或坏死；角化异常，表皮与真皮间出现裂隙，更严重的可有表皮层的缺失。
9 v0 y4 F; N V7 v0 H- e: y% u6 y' M& q, `" b( r. N5 _
由于肝脏是ＧＶＨＤ时常见被累及的器官，参照相关标准［１４］，进一步对肝脏进行ＧＶＨＤ组织学评分，由病理师在未知分组情况的前提下进行评分：０分，正常；０．５分，局灶轻微损伤；１分，轻度局灶病变；２分，轻度广泛病变；３分，中度广泛病变；４分，严重的弥漫性病变。
! W* A# d' S$ {) P
3 A7 A$ ]# r, y# j( |& R0 F! r3 w１．４．４ 统计学分析 采用ＳＰＳＳ １３．０软件，Ｍａｎｎ-Ｗｈｉｔｎｅｙ ｔｅｓｔ分析组织学评分，以Ｐ ＜ ０．０５作为显著性差异的检验水准。* Y8 J) m/ `' s, _# [' I& }
, U9 Y0 }1 k3 Z' X7 L; p
２ 结 果6 P7 Z3 o7 D& @" A7 o
2 b' o, P0 M8 i: d6 ~- l# w
２．１ 移植大鼠的一般情况& J- j' X1 ]* S( d) A
' X5 ?4 k2 i% h1 ?& r& R6 u单纯照射组大鼠在预处理后的２周内全部死亡，骨髓病理表明死于造血衰竭。骨髓移植组在３０ ｄ的观察期内有３只死亡，该组大鼠虽未见严重腹泻，但移植后１ 月受体头背部、腹部可见明显脱毛现象。骨髓与ＭＳＣ 共移植组在第２６天不明原因死亡１只，在观察期内未见明显脱毛现象。$ @0 b; |6 q( X, q. N- T" C# ?0 {
G' w8 o8 \ H２．２ ＭＳＣ与ＢＭ共移植可减轻ＧＶＨＤ的严重程度
9 p5 K% |- l5 [
" s* \ B$ H- x移植后３０ ｄ，骨髓移植组皮肤有２ 只出现中度ＧＶＨＤ 损伤，表皮角化异常，基底细胞空泡变性，表皮与真皮间有裂隙，其余呈现轻度ＧＶＨＤ（图１Ａ）；骨髓与ＭＳＣ共移植组仅有一只显示轻度ＧＶＨＤ。骨髓移植组肝脏可见肝细胞水肿变性，汇管区淋巴细胞浸润，胆管细胞变性（图１Ｂ）；骨髓与ＭＳＣ共移植组仅见肝细胞浊肿，汇管区少许淋巴细胞浸润。进一步对肝脏进行ＧＶＨＤ组织学评分，结果显示骨髓移植组与共移植组分别为１．４３ ± ０．２９、 ０．５６ ± ０．１８（Ｐ ＜ ０．０１）。肠道ＧＶＨＤ 的出现通常是严重ＧＶＨＤ 的表现，在ＢＭ 组有一只肠道可见腺泡细胞坏死，固有层炎症细胞明显浸润（图１Ｃ）；而ＭＳＣ 与ＢＭ共移植组肠道未见明显异常。２．３ ＭＳＣ与骨髓共移植对脾脏结构重建的影响2 g/ N* F* T4 y
# |6 l! S3 ]( q在骨髓与ＭＳＣ共移植组，受体脾脏结构接近正常，红髓和白髓发育良好；在单纯骨髓移植组，受体脾脏白髓萎缩，动脉周围淋巴鞘只有少量Ｔ细胞，无典型脾小结形成（图２）。' ~1 ]7 |8 U; ~7 B, h% \
/ W, C5 m7 G9 E v8 I7 E* u３ 讨 论! H& c4 `& q o: E2 H6 v
2 v0 R4 s- [. V- Q/ {; Z1 s# B间质干细胞具有显著的免疫调节作用。体外实验表明ＭＳＣ可明显抑制同种抗原诱导的Ｔ细胞增殖反应，并被试用于同种造血干细胞移植后移植物抗宿主病（ｇｒａｆｔ-ｖｅｒｓｕｓ-ｈｏｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ，ＧＶＨＤ）的治疗。有认为ＭＳＣ可减轻同种造血干细胞移植后严重ＧＶＨＤ症状，尤其是改善对常规免疫抑制剂抗性的严重ＧＶＨＤ［６－１１］，但是也有报道并未肯定ＭＳＣ的治疗意义［１２］，可见ＭＳＣ治疗效果不稳定且临床没有足够的指标可以对此作出解释，ＭＳＣ能否在临床推广应用，如何制定安全有效的治疗方案，促使我们必须对其体内免疫调节机制进一步探讨。在前期工作中，我们着重分析了ＭＳＣ对同种骨髓移植后造血重建和免疫功能恢复的促进作用［１５］，本研究进一步分析ＭＳＣ对同种骨髓移植后ＧＶＨＤ攻击的靶器官的结构影响，尤其是对骨髓移植后脾脏结构重建的影响。结果发现，ＭＳＣ可明显抑制ＧＶＨＤ发生时对靶器官的损伤并促进脾脏结构重建。脾脏作为重要的外周免疫器官，其结构的恢复进一步支持ＭＳＣ对免疫功能重建的促进作用，这一结果提示ＭＳＣ对同种骨髓移植后免疫重建困难而引起的严重感染也有一定作用。
$ B$ n7 f' x! G8 d3 ]7 Y+ m4 P$ C- _! {4 |* I
最近有报道还发现［１６］，虽然第３体来源ＭＳＣ可显著抑制同种Ｔ细胞增殖，但是对ＥＢＶ和ＣＭＶ诱导的外周血特异Ｔ细胞增殖和ＩＦＮ-γ产生并无明显影响，也不抑制ＥＢＶ和ＣＭＶ病毒特异性ＣＴＬ对靶细胞的杀伤力。进一步通过体内研究也发现由于严重ＧＶＨＤ而接受ＭＳＣ治疗的患者，其体内依然保留一定数量和功能的ＣＭＶ特异性Ｔ细胞。可见ＭＳＣ对同种抗原和病毒特异性Ｔ细胞反应的影响明显不同。上述结果均提示，ＭＳＣ在用于ＧＶＨＤ的治疗时，似乎并不影响机体的特异抗感染力，并可能由于免疫器官和细胞的尽快恢复而提高其抵抗力。/ _5 L% {2 y8 j j5 k* f! X
; M' I2 l5 C0 T! B {
尽管如此，从ＭＳＣ的免疫抑制作用被发现，并被试用于ＧＶＨＤ的治疗，始终困绕人们的问题就是：ＭＳＣ在抑制ＧＶＨＤ的同时，是否容易招致肿瘤复发？显然上述研究结果或相关研究还不能对此疑问作出解释。体外实验发现ＭＳＣ可通过与Ｔ、Ｂ、ＮＫ以及抗原递呈细胞间的作用发挥免疫抑制效应。一些可溶性因子，如ＨＧＦ、ＰＧＥ２、ＴＧＦ-?茁１、ＩＤＯ、ＮＯ、ＩＬ-１０等可能参与ＭＳＣ的免疫抑制作用，此外，一些细胞接触依赖因素也可能涉及［１７，１８］。但是在荷瘤背景下，ＭＳＣ对瘤细胞增殖的量效和时效关系仍需进一步探讨。0 }! Y- E* ^4 E* J, \
1 y# m& }" q- F3 N- \& J d% A
由于ＭＳＣ易于获得和体外扩增，体外显著的免疫抑制效应和部分体内实验的结果支持，因此最近已见ＭＳＣ用于临床的报道。初步病例分析显示ＭＳＣ无明显毒副作用，并可改善对常规免疫抑制剂抗性的严重ＧＶＨＤ症状［１０］。而ＭＳＣ能否在临床推广应用，如何制订安全有效的治疗方案，促使我们必须在理想的动物模型对ＭＳＣ的体内免疫调节机制进一步阐明。
3 |" S2 g/ I5 P" i2 U* ]3 K 【参考文献】0 m! y7 Z) U- i2 t0 ~! Q
Ｐｉｔｔｅｎｇｅｒ ＭＦ， Ｍａｃｋａｙ ＡＭ， Ｂｅｃｋ ＳＣ， ｅｔ ａｌ． Ｍｕｌｔｉｌｉｎｅａｇｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ａｄｕｌｔ ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ， １９９９，２８４（５４１１）：１４３－１４７．9 u1 }2 x9 R; ]0 m! x
5 O1 l" F; g' a1 W4 s& T1 B3 u
. q4 Z+ |3 e$ M. T! g) m/ f! _/ r+ n& H: @' m+ B; z
Ｗｕ ＧＤ， Ｔｕａｎ ＴＬ， Ｂｏｗｄｉｓｈ ＭＥ， ｅｔ ａｌ． Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ｒｅｃｉｐｉｅｎｔ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｃａｒｄｉａｃ ａｌｌｏｇｒａｆｔ ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ ［Ｊ］． Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ， ２００３，７６（３）：６０９－６１４．
) l! U* }/ m& K; D: i( t
% e/ j; |: r6 y& v
$ M2 E) ^+ `7 r! [- O$ S. p" o1 h/ T7 ^) I. ^/ N/ u
Ｐｅｒｅｉｒａ ＲＦ， Ｏ＇Ｈａｒａ ＭＤ， Ｌａｐｔｅｖ ＡＶ， ｅｔ ａｌ． Ｍａｒｒｏｗ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ａｓ ａ ｓｏｕｒｃｅ ｏｆ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｎｏｎｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｔｉｓｓｕｅｓ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ａ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ ｏｓｔｅｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｍｐｅｒｆｅｃｔａ ［Ｊ］． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ， １９９８，９５（３）：１１４２－１１４７． R/ c4 u* S, K a2 \) l4 ^5 w! _
0 G' A- V$ k6 m! {1 u% T& Q
" a- w2 @) G/ }+ X4 F' v: } z) `" z) n* e& d2 I
王亚柱，邓宇斌，甘丹卉，等． 大鼠骨髓间质干细胞定向分化为神经元的实验研究［Ｊ］． 中山大学学报：医学科学版，２００８，２９（４）：３８３－３８７，３９２．6 n3 \" U. q( }; u; |' D" x
) p; y; T, z8 S3 d9 V5 n; t
2 [8 I4 I1 o* {# I4 l
' G" y" w2 ?" w! ?" _
陈欣欣，张镜芳，曹 勇，等． 体外定向诱导人骨髓间质干细胞分化为内皮样细胞［Ｊ］． 中山大学学报：医学科学版，２００６，２７（３ｓ）：１２４－１２７．% P( o6 y0 d C, |- j) Q
& _, k! t' p1 }. X5 |
5 L" ]* J7 r' j4 Y" b% R ?$ \
2 Z) h$ q6 n: B7 a' `6 n$ M Ａｇｇａｒｗａｌ Ｓ， Ｐｉｔｔｅｎｇｅｒ ＭＦ． Ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｍｏｄｕｌａｔｅ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｉｍｍｕｎｅ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ， ２００５，１０５（４）：１８１５－１８２２．
5 r4 }! u- b$ B2 z0 w; w) B" P& N' p+ i- ~& |9 @4 o+ N
- {1 p2 {' \' A4 K& h! n! k; M; L5 t! A, t
Ｆｒａｓｓｏｎｉ ＦＬＭ， Ｂａｃｉｇａｌｕｐｏ Ａ， Ｇｌｕｃｋｍａｎ Ｅ， ｅｔ ａｌ． Ｅｘｐａｎｄｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ （ＭＳＣ）， ｃｏ-ｉｎｆｕｓｅｄ ｗｉｔｈ ＨＬＡ ｉｄｅｎｔｉｃａｌ ｈｅｍｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓ， ｒｅｄｕｃｅ ａｃｕｔｅ ａｎｄ ｃｈｒｏｎｉｃ ｇｒａｆｔ ｖｅｒｓｕｓ ｈｏｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ： ａ ｍａｔｃｈｅｄ ｐａｉｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ［Ｃ］． Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，２００２，２９：Ｓ２［ａｂｓｔｒ ７５］, b& T+ H9 |( g6 J3 D
! _; r& r% v2 B% ]; H
3 Y" P$ _% Z+ {6 P
& I; L3 j, C! ~2 O
Ｌｅ Ｂｌａｎｃ Ｋ， Ｒｉｎｇｄｅｎ Ｏ． Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｕｓｅ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ［Ｊ］． Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ， ２００５，１１（５）：３２１－３３４．+ @3 W) b) _0 D( g. v! m0 }+ f3 h" T
& D: G9 [5 ^- ~$ c% p* n& Q- K
" o# L' E% w* t
, d4 I9 J* q( a3 v w; a5 M/ Z Ｌｅ Ｂｌａｎｃ Ｋ， Ｒａｓｍｕｓｓｏｎ Ｉ， Ｓｕｎｄｂｅｒｇ Ｂ， ｅｔ ａｌ． Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｇｒａｆｔ-ｖｅｒｓｕｓ-ｈｏｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｗｉｔｈ ｔｈｉｒｄ ｐａｒｔｙ ｈａｐｌｏｉｄｅｎｔｉｃａｌ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ［Ｊ］．Ｌａｎｃｅｔ， ２００４，３６３（９４１９）：１４３９－１４４１．
" j4 ~7 L) w+ G) q0 R, K, R4 y5 V
/ y! I. ` [) N; c; _1 C5 @
6 f% J( Z: P( w7 n) X
- Z7 @% N3 H! F1 R, S1 ^0 D Ｒｉｎｇｄｅｎ Ｏ， Ｕｚｕｎｅｌ Ｍ， Ｒａｓｍｕｓｓｏｎ Ｉ， ｅｔ ａｌ． Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｙ-ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｇｒａｆｔ-ｖｅｒｓｕｓ-ｈｏｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ ［Ｊ］． Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ， ２００６，８１（１０）： １３９０－１３９７．
$ w9 Y5 b7 K/ E2 S% }& k! o! @( o X$ M+ W4 P4 x9 G! R
7 t9 ~- O# ]0 K) k
d! |& T7 |; M# z% I 黄绍良，周敦华，方建培，等． 间充质干细胞与脐血联合移植的Ⅰ期临床观察［Ｊ］．中山医科大学学报，２００３，２４（３）：３０６，封４．
# v9 K0 @1 E- Y( n2 N0 v
, F2 r- m- U9 A% i h6 O
3 f( K& f0 [6 i5 V9 c1 H* a, l: @' I* z* g3 |' t j& U
Ｌａｚａｒｕｓ ＨＭ， Ｋｏｃ ＯＮ， Ｄｅｖｉｎｅ ＳＭ， ｅｔ ａｌ． Ｃｏｔｒａｎｓｐｌａｎ-ｔａｔｉｏｎ ｏｆ ＨＬＡｉｄｅｎｔｉｃａｌ ｓｉｂｌｉｎｇ ｃｕｌｔｕｒｅ-ｅｘｐａｎｄｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］． Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ， ２００５，１１（５）：３８９ －３９８．. l7 X: H! b) i9 A/ ]9 _
$ F, \( |1 X$ O1 q" F. T; ^4 S5 L* ^
" ^0 d! b4 x& Z0 w: {& G
6 u2 m9 D* G2 R) C/ { H. @ 项 鹏，夏文杰，王连荣，等． 丹参注射液诱导间质干细胞分化为神经元样细胞［Ｊ］．中山医科大学学报，２００１，２２（５）：３２１．
$ ?/ T6 h- U. z. Z) m! w% e' q! J3 {! Q3 o
; ?) F& B* M3 }2 O1 T6 s1 b$ q
' O9 m l& R; ~) F! @ @' ? Ｇｉｖｅｒ ＣＲ， Ｍｏｎｔｅｓ ＲＯ， Ｍｉｔｔｅｌｓｔａｅｄｔ Ｓ， ｅｔ ａｌ． Ｅｘ ｖｉｖｏ ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｇｒａｆｔ-ｖｅｒｓｕｓ-ｈｏｓｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｗｈｉｌｅ ｐｒｅｓｅｒｖｉｎｇ ｇｒａｆｔ-ｖｅｒｓｕｓ-ｌｅｕｋｅｍｉａ ｅｆｆｅｃｔｓ［Ｊ］． Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ， ２００３，９（１０）：６１６－６３２．% |& ^2 S% e6 G: ^
Q2 d4 k/ f. Z0 p' m2 L8 q; ]* h+ \& D' [2 a; {+ r# s7 e7 k
' d: A3 m0 n8 x8 t0 c) O% h, \
雷俊霞，郭振宇，赵东长，等． 大鼠骨髓间质干细胞对同种骨髓移植后造血重建和免疫重建的作用［Ｊ］． 中国病理生理杂志，２００６，２２（６）：１１２９－１１３２．$ E5 q+ E i7 U$ |$ Q& Y
: n& Q) S. |8 I5 _/ q
5 f' f @1 v D& K/ Z
) [- n+ h4 j+ A$ ^+ q Ｋａｒｌｓｓｏｎ Ｈ， Ｓａｍａｒａｓｉｎｇｈｅ Ｓ， Ｂａｌｌ ＬＭ， ｅｔ ａｌ． Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｅｘｅｒｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ａｌｌｏａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ｖｉｒｕｓ-ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ［Ｊ］． Ｂｌｏｏｄ，２００８ Ａｐｒ ２９． ［Ｅｐｕｂ ａｈｅａｄ ｏｆ ｐｒｉｎｔ］* n7 L! ~/ z/ K7 r. \0 y5 l
+ Y4 m: ?! a! c1 N" T
' c J) V5 {- X3 z; Q+ q4 F
8 B8 ^5 Z& @/ A4 O
Ｓｔａｇｇ Ｊ， Ｇａｌｉｐｅａｕ Ｊ． Ｉｍｍｕｎｅ ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ ｏｆ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ-ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ［Ｊ］． Ｈａｎｄｂ Ｅｘｐ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ， ２００７，（１８０）：４５－６６．
1 Y, ?$ F- E, { B- g. P1 v. s/ `- f- L9 L x
6 ~$ K9 D) H2 f' R$ f
9 o* }' L% V* l Ｎａｕｔａ ＡＪ， Ｆｉｂｂｅ ＷＥ． Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ［Ｊ］． Ｂｌｏｏｄ，２００７，１１０（１０）：３４９９－３５０６． |
|
发表于 2009-3-3 12:31
发表于 2015-6-10 15:10
