求教：那个细胞团是怎么回事？

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4 ~" X1 o! `$ d0 C9 f
! b: s  s- J& R" v7 C我养的是兔的间充质干细胞，培养基GIBCO的含15%血清，以下是传代后4天的图片，传代的方法如下：
# q5 X0 T. G$ i* ~. Y1 弃培养基；
9 x% H' s; S. j( P" u2 6mlPBS冲洗瓶身；. ^1 i3 L5 ?, u
3 0.5ml 0.25%胰酶在37℃培养箱中温育2min;& i. w. x5 p4 p6 q" P% f
4 倒置显微镜下观察部分细胞出现漂浮，变圆，超净工作台下加培养基10ml;# g" y* O. w" O* k4 q& X
5 移液管重悬后分装5ml至新的培养瓶中。
! m/ x* d' x# B5 p问题：那些细胞团块是什么，怎么传代后4天细胞贴壁数量感觉不是很多，请大侠们给点意见。
! v9 H( T; U/ |) ?谢谢！

绕指余音

你养的是什么干细胞啊？脂肪干细胞？脂肪的话就有可能是脂滴。再有，你的细胞状态很不好，传代的意义不是很大。

雨希

这些是从原代分离的干细胞吗？细胞团块可能是死细胞了。你可以多换几次培养液，看团块有没有减少。

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忘记说了，养的是兔的骨髓间充质干细胞，原代培养后传代的。

luoziwei

我觉得是传代离心后吹打不均匀造成的，而且消化过度，死细胞过多，因而贴壁的少

gaorongbest

传代一般不会出现这样的情况,除非你的原代细胞状态不好,传代后细胞死的多,而且我看你消化后的消化液根本就不去除就直接加培养基,这样,可能会影响细胞状态吧,反正我们一般都离心去胰酶后才加培养基的;还有,你的细胞吹打均匀了不?

shuishanglingzi

你消化完后没有把消化液离心去除，这样胰酶对细胞的损伤很大，所以好多细胞都死了。

hawkyiger

给张原代的照片看看，看看你传代之前是什么样子。许多人都说细胞传代后死亡是胰酶消化过度啊什么的原因，那是次要的感觉。细胞本身的状态是关键，如果觉得原代细胞不好就没必要继续了。。。

get0715

如果你原代的细胞状态很好的话，从你的传代过程中个人觉得可能存在几个问题：/ s" n" ?' A6 r6 |+ u* G0 t; r
1、最重要的用胰酶消化细胞时，主要看的不是时间，而是胰酶对细胞的作用程度，消化时完全可以不放在培养箱中，放在显微镜下观察，当大部分细胞呈现回缩现象的时候就可以拍瓶、加入培养基终止消化了。你的情况最大的可能是细胞消化过度，成团或不贴壁的细胞已经死亡。
$ `, t; H3 w/ a8 Q* ^0 K6 D  a! l2、不太清楚你用的是多大的培养瓶，加了0.5mL的胰酶，细胞瓶小，没有去除胰酶的情况下，含有过量的胰酶就会造成细胞不易贴壁。可以将终止后的细胞悬液1000rpm离心5min。
+ m. e& j& ^+ y4 o3 V& q7 J* A6 x3、细胞成团成堆贴壁就是因为细胞没有分散开，影响细胞的贴壁和生长。

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我用的是25cm2大小的瓶子。不敢离心，怕细胞没有了！！