间充质细胞培养

liqinzhan

1、无菌抽取人的骨髓20毫升，& h9 V$ W4 L: U$ \- L, M
2、离心3500转*10min，取上清放入无菌培养瓶
9 t! Z' X) i; H3 e) ]% y0 z  w3、剩余红细胞加pbs按1：3比例混匀，再离心3500转*10min9 d- V! F' Z. w, j
4、吸除上清后轻轻将白细胞层吸除放入无菌培养瓶中，加入自体血浆和培养基混匀
# J: S7 G5 J1 [; w( f" Y& A4 f5、 放置37°二氧化碳培养箱内培养5天。  
5 s  y" c" {% R  ?2 C6 h* `    （第一次做没经验，怕取的白细胞少，重复洗了两遍）. V8 P/ @/ d; O, `6 F% j
      今天是第6天，早上去实验室看了细胞，里边全是红细胞，看不到一点贴壁细胞，请问我现在 能给它换液吗？？？
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why121

你是养红细胞？ 为什么不用裂解液呢 骨髓MSC很多文献都有介绍方法的哦

why121

你是养红细胞？ 为什么不用裂解液呢 骨髓MSC很多文献都有介绍方法的哦

呼吸

培养前应该把红细胞裂解掉，而且你用的培养基成分是什么，是否加了重要的因子。正常3-4天就可以看到贴壁的（好的话，再过个一天两天就可以传代了）。

liqinzhan

怕取白细胞少，所以就多吸了点红细胞，我们每次都是这么培养的，都好好的呀，不知道这次怎么只看到红细胞没见有贴壁细胞，是不是因为红细胞太多看不到贴壁的呀？？？？？本次采用的是全水培养法，没有用淋巴分离液，用的培养基是DMEM。

daviddow

第六天你都没有给细胞换液，太可怕了吧。第二天你就应该给细胞换液。