【求助】请养内皮祖细胞的朋友进来看看，我养的EPCs怎么是这样的形态呢？

chinajinlei

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% q( y( O+ R) S. f9 u5 J来源：兔外周血  H; O8 Q8 ^# u2 z8 U& ]) L6 i
单个核细胞的分离：1.096的兔淋巴细胞分离液密度梯度离心
; Z1 w9 H- T3 U; D# [5 O9 |( n# XEPCs的培养：48 h后, 洗去未贴壁的细胞, 将贴壁的细胞继续培养) \' u( Q( J! C, E6 a
培养液：Cambrex公司的EGM-2培养基, b& ?4 h2 Q. c& W' h. g2 ^
& _! z3 L, N5 f* O( G$ Q
问题：
5 B$ S) f( @" Q8 `4 B/ W(1)文献中报道的内皮祖细胞多为梭形或是铺路石状，而小弟养的怎么是如下的条带状状呢，不知道朋友们是否遇到过类似的情况。请指教？
0 L$ G: `0 k& T0 }+ Y, V* g* r(2)打算从兔外周血培养晚期EPCs(即"late" EPCs 或outgrowth EC)，正确的培养方法应该是什么时候首次换培养液呢？9 R" D2 E, _3 S! E9 v; ^- R
非常感谢您参与讨论。6 r- A  C) `8 x5 c$ n% w

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我爱光明2009

考虑EGM-2培养基里含的生长因子刺激过度。

zoe

能否上清晰点的图？您的图细胞形态不太清晰。
/ ]; _: |' q. i3 O* I" t我也在养这个EPCs，但是大鼠骨髓来源的，也在苦恼该用哪种方法。

benben

我一般3-4天首次换液，兔的没有养过，大鼠的一般七天左右呈针样或内皮样。

zoe

请问如何提高EPCs的纯度？通过传代可以吗？

chinajinlei

曾在帖子中看过有朋友这么做“先在倒置显微镜下寻找一个比较好的EPC克隆，周围杂细胞较少的，纯度较高的，用1ml枪头将此克隆上划下来，将枪头蘸上的细胞重新接种培养。”! b3 N2 l7 O; _! J
欢迎高手继续参与讨论

zoe

能具体说下如何将克隆划下来吗？

zoe

如果用外周血培养，是不是可以得到相对纯些的细胞？我在培养过程中发现骨髓里含有太多成纤维细胞了，其长势很快就盖过EPCs。

chinajinlei

chinajinlei 发表于 2010-12-15 11:48
( c8 i3 h$ |6 `. B' |+ ~: x) q曾在帖子中看过有朋友这么做“先在倒置显微镜下寻找一个比较好的EPC克隆，周围杂细胞较少的，纯度较高的，用 ...

; D1 B: N$ p9 s) o" P3 Q0 L* R
我仅做过从外周血里面培养内皮祖细胞，骨髓里面内皮祖细胞的含量应该比外周血多一些。
# t6 J& Q- E2 @, `2 ~/ j这是在别的论坛上看到的方法，我还没有试过：“在倒置显微镜下，用小枪头挑选较好的克隆，将其单独挑下来，轻轻吹打，接种继续培养。” 请做过细胞提纯的朋友多多指教
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zoe

用枪头吸下来后还需要用消化液消化打散吗？