流式做的而细胞周期和调亡

liujucool

各位大侠帮忙看看我做的流式 图1是实验组  图2是对照组  刚开始接触 看不懂  请各位指教 总觉俩个结果反了  我们实验室没有流式仪 找公司做的! |  A: s( C( d& q. n% T! x, l

leisong12

下面的图是对照，上面的图是可看到sub-G1峰（代表凋亡）的实验图。图总体看还可以，数据看起来也还可以。下图最好也能把G1峰对准200道的地方。周期分析是用的Modfit软件么？用该软件生成的图可能更好看一点。找公司做多少银子一个样？

hanchao

你的实验处理，造成了细胞出现明显的凋亡峰啦~而且促使细胞从G1期向S期转化。恩 G2期没有什么明显变化。但是你的实验组的CV值较高啦，一般来说 结果的CV值大于10的话，结果的可信程度会下降。

liujucool

回复 hanchao 的帖子$ t2 Y% a% ]6 \" v+ b  b; `
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30块一个样；对照组数据和实验组数据传反了，太不意思了，讲的能通俗些吗，以前没有接触过流式，跪谢

hanchao

通俗点~~通俗点，就是说，你的图图的横坐标代表你的PI荧光值。纵坐标为细胞数。图C001在200处出现的峰  可以认为是你的细胞内染色体条数 也就是n 或者为停留在G1期的细胞数。而400处出现的峰 就应该是2n个染色体数 也是停留在G2期的细胞数（细胞分裂 染色体条数*2）。二个峰中间的部分为S期的细胞数。你的图C001在100位置出现的峰。应该称作凋亡峰（为什么你可以百度）。CV值是可以作为评价机器检测出结果的可信度的一个标准。仅供参考~嘿嘿。

hanchao

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& {7 I! p8 R) L" |; b7 ^: W: h 碘化丙啶(Propidium，简称PI)是一种双链DNA的荧光染料。碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。# ?/ X; |# O; g! z. r" i( m
    碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA片断在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。/ p( a, d6 R3 c9 }) ~9 p: R( c
    细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察细胞凋亡情况

liujucool

回复 hanchao 的帖子0 ]9 F9 m: f! W& f  Q) {2 {8 }

# i: E  r" n2 p% ~7 Z& J学习了
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liujucool

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' V1 ^1 S. ^& Z4 R# w; h/ t6 J师姐问你几个问题，PI好像只能进入死细胞，图中所示不是所有细胞吗；结果的凋亡率怎么得出来的；CV具体什么意思   有点罗嗦  别见怪  呵呵

hanchao

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发生凋亡的细胞核内DNA断裂会产生许多小片段。你的细胞之前是不是要经过70%冰乙醇处理？这步的作用是由于乙醇迅速溶解细胞膜中的脂质，对细胞产生通透作用，即在细胞膜上形成小孔，这就不涉及活细胞死细胞的问题。小孔导致小分子量的DNA片段穿过胞膜至乙醇溶液中而丢失，仅剩下大片段的DNA，最终导致凋亡细胞内DNA含量减少，从而形成一个DNA含量小于2n（G1期峰）的分布区，称为凋亡峰或亚G1峰。那个CV值 你不用过分关，。只需要知道检测细胞周期时，小于10的这个标准即可。+ W5 ?- b3 r6 `, }/ Y3 Q

liujucool

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5 b4 \% k4 L6 t& w* e
! e' s: F8 K" S( I3 T跪谢 师姐 那我的实验结果可信度不高了 并且实验因素导致细胞大量调亡对吧