MEF 原代细胞培养多久贴壁呢？

水火亦容

你的培养基就是单纯的DMEM？没有FBS的话，肯定不贴壁呀！

taoli10000

回复 水火亦容 的帖子8 ?- U" Y0 u5 q- t2 F5 J
7 Z/ x" x( }  _; t
是加了FBS的DMEM

syl82

3 v) p1 p, }& ^! _7 G1 Q  {# n$ u. K) [/ D7 J! y0 V
小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryonic fibroblasts，MEF）的复苏
6 i7 j6 Y0 n/ u5 d' M) w胚胎干细胞一般是在37℃、5%CO2和95%湿度的培养条件下，生长在铺有一层滋养细胞层的细胞培养皿或者是细胞培养瓶中（此处以细胞培养皿为例）。因此要先铺滋养层细胞。
# x9 W8 P( K. V6 n% ~
, t0 k9 d5 g' R1 Z# F& P在37℃水浴锅里快速融化一管液氮冻存的小鼠胚胎成纤维细胞。
5 X; [  g4 ]# Q. H把融化的细胞悬浮液加到装有几毫升预热好的MEF培养基的无菌离心管中，轻轻混匀后，1000×g ，5min离心收集细胞。 ! F# a0 Y1 [8 L: y+ l! X
吸掉上清（除去冻存液中的DMSO），用10ml预热的MEF培养基重悬细胞后，加到一个10cm的细胞培养皿中，放入37℃，含有5%CO2的加湿培养箱中培养。
$ N- R$ z9 _( ?: {" {( j5 D$ G根据情况对细胞进行换液，大约4天左右，细胞就可以基本长满整个培养皿，这时可以进行传代、冻存或用于制备滋养细胞层。 5 @+ [6 Z1 Q; |; j

钻石星辰

你养的那些细胞应该比MEF要更皮试些~所以没去DMSO问题可能不大。但MEF一定要离心去除DMSO。
/ l% L2 @! p: F) u1 w+ |6 Z我一般下午5点分的MEF，晚上7点过去看就有很多都贴壁了。

f5_105

你直接解冻了就放到培养瓶里养么？解冻了以后最好用hiDMEM培养基稀释离心一下，去除冷冻保护剂，之后再用含10%FBS的hiDMEM打匀移到培养瓶里面，不然会对细胞有影响的。原代的细胞是挺脏的，很多组织块，没关系。

skyjasonli

回复 igdb 的帖子
7 w" i  m2 F0 S/ a  s. Z5 q
( J* E+ _& [8 @7 a3 Z% K  ?# Z) ]我买~哈哈
) H/ F) U  Y% o3 S( b小弟在北京，最近正要开始折腾这个呢，各种茫然啊~6 C, Y8 q) [, i4 Q6 N
不知兄台能否惠赠几支，言传真经一下？
1 d. _1 P" u; V1 Y& ?* J1 R请客吃饭  以为答谢~ 哈哈，联系qq：410035013
5 x! v- N( B7 C9 W" x" Z

573639471

回复 igdb 的帖子# I! ]7 A$ X2 M* _4 ?
: Q* o0 Q. j. L, J: e
很好做吗？不是说这个鼠不容易受孕吗

igdb

回复 skyjasonli 的帖子+ O$ ?1 [  D5 ~( D- g2 E" Z

2 u: U! B6 ?) b4 T/ P阔以阔以。。木问题。。你哪个所的？导师是谁？

xiangchou812

2000多一管小鼠胎儿成纤维？也太贵了点吧？弄两只小鼠，自己配种、自己做吧。很简单。* ?5 F' G( B3 X% G9 T6 c) N: Z
我想你那个可能是运送过程中出了问题，解冻后离心前后适当吹打一下。

573639471

回复 igdb 的帖子
1 N7 T# L- @: I  S7 B; `8 q; J" U$ H3 q  u9 y- F
你是北京哪的？我也在做ＭＥＦ