养过MEF的帮小弟看看自己怎么长成这个怂样了

随风的天使

感觉主要是密度太低了，在这个基础上再加上3倍，会好点，细胞密度过低，细胞之间不能连接，在分裂生长时不利于生长。还有谷氨酰胺的影响不会很大。我们做的时候不会特意加，最终效果也很好，还是密度太低吧。

happygrass333

我以前做过一批mef复苏出来就是这个样子，就是冻存的时候出了问题。看样子细胞非常的不好，铺展不好，后续试验如果能不用就别用了。

yyp0609

/ }7 d' @$ {5 @. d; F' V* J
# t' \# k3 I) l' O( p, ~/ M* [1 @谢谢， 结合前几个兄弟的意见，昨天又复苏了一管  只铺到一个10cm的dish，起始密度大概40%。以前同样的细胞我铺到7个60mm的dish里，起始密度10%都不到。 情况好了很多，虽然也能看见有分化的和老的，但是比以前好多了。看来MEF对初始的细胞密度要求还是很高的。下一个需要解决的问题是怎么在试验的15天以内少传代，免得都分化了。现在还在迷惑中，不知道谁有好的建议

st_oliver

回复 yyp0609 的帖子
+ g! K- C; ?. w% `$ O: f& R8 Q. P# k5 U
其实看了你的帖子 我感觉很奇怪$ C1 o. C! ~7 G, \) F7 r+ C) U
你是在养的MEF吗 不知道是用来做什么的
; U' |/ f# Q+ W. W4 W4 l8 v  U2 h看到你的图片 只能说细胞状态太差了& L' |% H( W6 l% c' U
我用MEF都是用来做饲养层 一般都是做好的原代 传一代后冻掉
9 E: g3 P7 q1 X2 _$ I解冻出来就是p2代了 " _6 }- o5 [) l9 A1 R8 U5 u& y: E3 ]
然后直接铺饲养层
/ V8 n3 U0 K" ]- [! Y在这种情况下 细胞一般状态非常好 做饲养层也非常好 " d9 P8 k9 c. e! T) F6 @
解冻出来传一代再做也还可以 6 X+ H1 z: H( i# C
不过再多传的话就肯定不太好了
( R/ u: y1 Q/ X! X: ?希望我说的这些对你有所帮助

loveL85

我的MEF为什么冻了才一个月这样  复苏的存活率几乎为0啊 ？哪位分享下经验呗

nydfy

怎么会长成这样，前几张图貌似有分化的嫌疑，后面的就是老化了，但你的培养看不出什么问题！

leestone

其實P0就可以凍了$ H9 T3 k2 s" u6 u, T# `1 ]# n
MEF最多也就5-6代
# i5 W0 [) a. f4 L4 i  g2 M" v再上去就不太長了..

ESstemcell

第1张图片看来还可以，就是细胞密度太低了。 总的来看，应该是细胞太老了，太数太多了吧

esc123esc

L-glutamin是要加的，一般在溶液里面一段时间后比较容易降解，invutrogen有卖glutamax的，是优化过的在溶液中能够比较稳定，我一直就用的这个还可以。你那个后面的图片看起来应该是冻存的这段时间中受伤了，过渡到低温之后尽量早一点放进液氮，我之前在-80放了4,5天之后再放到液氮的MEF也是这个样子，而且密度很小状态很不好，时间长了也还是很难长好。