pri-miRNA的超表达能用pEGFP-C1吗？

runsong

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1 U0 t+ V% J  o. o+ G. w  i$ {2 O
7 l  z2 d5 y( N( Y6 k谢谢你从前的指点，一个多月前我按照你的方法把载体建好了，定量PCR显示34c上调了9倍（以5s为内参，34c与5s的Delta Ct由9.9上调为6.7），现在正在进一步探求34c诱导的效应。. y, e) x; K7 M) n" y9 G
不知你们照此法得到的结果如何。
& j( I* m2 l, d( l6 v

深海寂寞鱼

回复 runsong 的帖子9 h) F4 W7 o) O/ n4 I* C7 F0 i

' ]5 e9 C4 ~" U8 f恭喜你啊。
3 f1 E; O' J+ ]. o2 O& B5 B不知道你是做的顺转还是稳转？( f, _3 Y3 r" @$ p
我们通常都是做的稳转。不同克隆间的表达水平略有差异。
. u5 e: r9 w% L' _  F: P一般都是几倍到十几倍。$ L' ]! K% v  y2 t: o( ?
所以好像和你的结果差不多。

sannia

回复 runsong 的帖子6 a7 h5 v* M. V5 H% X" O7 `
4 R7 I% y! l- {) ?8 B
你好，我最近也要做这方面的载体。. S5 B: f+ n$ L
不知道楼主能不能共享一下质粒的序列，我看看GFP与primiRNA的之间连接序列

runsong

回复 深海寂寞鱼 的帖子: V# F5 q% F, r3 ~, r# `7 [8 S

" c# ^+ M4 B+ |# _; M我做的是瞬转，转染效率约为60%，转染后3天收样。你们那里还有做稳转的吗。

runsong

回复 sannia 的帖子
6 |9 {- g/ }" W4 K0 l& I7 V
9 N/ E& ^6 ~1 Z' ~; p/ y$ C9 \我是按照深海寂寞鱼的方法做的，附件里有全部资料，不清楚的话再联系我。

runsong

附件

sannia

感谢之至！

runsong

我的课题是：miRNA在雄性生殖细胞分化和发育中的作用
2 k" w2 |2 G& G% @- R" ^6 F" L% o9 e以后多交流

runsong

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