pri-miRNA的超表达能用pEGFP-C1吗？

runsong

回复 深海寂寞鱼 的帖子5 w; Z2 }# H% g5 ?1 I5 O
4 [! _3 P& [* R/ v1 x7 X1 C3 h9 J
谢谢你从前的指点，一个多月前我按照你的方法把载体建好了，定量PCR显示34c上调了9倍（以5s为内参，34c与5s的Delta Ct由9.9上调为6.7），现在正在进一步探求34c诱导的效应。  A0 ^9 {& F1 e
不知你们照此法得到的结果如何。
$ ]: _0 o# G$ `5 i$ ?0 Q

深海寂寞鱼

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" V# U; `5 }% c3 y% G# n( |
/ `: I5 w* h; `0 F0 T恭喜你啊。: F" k6 B/ E" M5 F3 p, F5 h
不知道你是做的顺转还是稳转？
- R( s5 o- J& M$ V4 N( Z0 |+ U- `我们通常都是做的稳转。不同克隆间的表达水平略有差异。
: m8 M/ d# K" v) t8 X0 _一般都是几倍到十几倍。& `! B3 J4 u- U6 q8 b8 R
所以好像和你的结果差不多。

sannia

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* y" j: d4 Q& f+ B3 _
/ d4 J! ~& U* P. [  C/ E8 z你好，我最近也要做这方面的载体。6 B1 y8 l% C" o2 Z8 _' f! c
不知道楼主能不能共享一下质粒的序列，我看看GFP与primiRNA的之间连接序列

runsong

回复 深海寂寞鱼 的帖子" C% ^) m4 A, F+ W. p: l& g

# b" ]. I- L8 A我做的是瞬转，转染效率约为60%，转染后3天收样。你们那里还有做稳转的吗。

runsong

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& m) s1 b8 x1 w4 x/ H8 Z+ }. y! \8 j  U) J
我是按照深海寂寞鱼的方法做的，附件里有全部资料，不清楚的话再联系我。

runsong

附件

sannia

感谢之至！

runsong

我的课题是：miRNA在雄性生殖细胞分化和发育中的作用
" f( O; p  m& A" h* }- O9 g以后多交流

runsong

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