pri-miRNA的超表达能用pEGFP-C1吗？

runsong

回复 深海寂寞鱼 的帖子8 M" U5 T- T& V+ _
3 ~4 b: F6 n* C
谢谢你从前的指点，一个多月前我按照你的方法把载体建好了，定量PCR显示34c上调了9倍（以5s为内参，34c与5s的Delta Ct由9.9上调为6.7），现在正在进一步探求34c诱导的效应。( k4 G5 p$ `5 t8 W7 ]- e. i; B
不知你们照此法得到的结果如何。- u4 d7 ?! t8 o; p8 T2 W! R4 Y5 |! d5 I

深海寂寞鱼

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" W. z5 b4 ?' ~& G- F: C3 n  D- ~, s  K1 D
恭喜你啊。
/ T* r8 u4 v2 A' t" N7 L不知道你是做的顺转还是稳转？3 r- Z9 c) F2 ~# g+ e0 \* B
我们通常都是做的稳转。不同克隆间的表达水平略有差异。5 `: {4 \) A3 S/ y& D
一般都是几倍到十几倍。
- v5 Y. T) x; _+ s& J所以好像和你的结果差不多。

sannia

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( I. o: r$ \# x' H$ B- Z5 h, Y* V' Z  M: D: t* ~! r
你好，我最近也要做这方面的载体。
* I% l6 \/ k, P( S, ]% D不知道楼主能不能共享一下质粒的序列，我看看GFP与primiRNA的之间连接序列

runsong

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6 ^( |, p6 |( F: w! }, j( U$ i1 @2 Q0 {& d8 i! |
我做的是瞬转，转染效率约为60%，转染后3天收样。你们那里还有做稳转的吗。

runsong

回复 sannia 的帖子. @' g5 z0 a5 f1 s: k
$ a* s- ^; f* _
我是按照深海寂寞鱼的方法做的，附件里有全部资料，不清楚的话再联系我。

runsong

附件

sannia

感谢之至！

runsong

我的课题是：miRNA在雄性生殖细胞分化和发育中的作用. n( g1 s; u8 M; o# X+ ]
以后多交流

runsong

我的课题是：miRNA在雄性生殖细胞分化和发育中的作用4 n5 W& V# x* `2 h: a
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runsong

我的课题是：miRNA在雄性生殖细胞分化和发育中的作用" m0 U+ p# u3 D: K4 x, c
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