pri-miRNA的超表达能用pEGFP-C1吗？

runsong

回复 深海寂寞鱼 的帖子1 w, l$ k% d, W' S
( _* |2 {3 r7 p3 C
谢谢你从前的指点，一个多月前我按照你的方法把载体建好了，定量PCR显示34c上调了9倍（以5s为内参，34c与5s的Delta Ct由9.9上调为6.7），现在正在进一步探求34c诱导的效应。4 W: |  m" _/ o& o0 J9 X  a6 W6 ~
不知你们照此法得到的结果如何。
$ S! `+ J0 _0 A. x  S* E5 N  |- z

深海寂寞鱼

回复 runsong 的帖子
* z' U2 }& W% ~) s& m2 _4 @, ?- e
# \% l8 |  v  @& @恭喜你啊。! x$ Q& p+ W  [/ Q6 Y0 K" t
不知道你是做的顺转还是稳转？
, [' Q+ T& p+ U- w/ u0 I- W  x我们通常都是做的稳转。不同克隆间的表达水平略有差异。; q, {, a  v7 V
一般都是几倍到十几倍。; `8 j+ Z5 H, Y. e' O/ y
所以好像和你的结果差不多。

sannia

回复 runsong 的帖子" U. g" R& a5 A& d( J( f
4 p% `  G7 j8 m8 _9 M3 Z
你好，我最近也要做这方面的载体。
+ K( q6 \. g5 h  {' [不知道楼主能不能共享一下质粒的序列，我看看GFP与primiRNA的之间连接序列

runsong

回复 深海寂寞鱼 的帖子
1 ]7 q) C; M7 S1 `- Q8 O1 _: g# e9 w: g9 a% J8 E: K% r' r! c' A: U
我做的是瞬转，转染效率约为60%，转染后3天收样。你们那里还有做稳转的吗。

runsong

回复 sannia 的帖子. p2 P7 _% ^, e  S7 e
' m$ W9 U8 U1 J5 g9 L& a' O
我是按照深海寂寞鱼的方法做的，附件里有全部资料，不清楚的话再联系我。

runsong

附件

sannia

感谢之至！

runsong

我的课题是：miRNA在雄性生殖细胞分化和发育中的作用
) Q  Z$ _2 J% M, d, L以后多交流

runsong

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