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楼主: runsong
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[请教] pri-miRNA的超表达能用pEGFP-C1吗?   [复制链接]

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21楼
发表于 2011-3-11 17:59 |只看该作者
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回复 sannia 的帖子
2 q$ z+ I: E0 Z$ W
  H6 f- q+ L4 @; X6 b我这么做只是因为经费问题,如果经费充足的话最好卖载体,或用慢病毒载体。% u( w$ w% F9 L! v/ ^( p
用模拟物也很好,不过比较贵,转染试剂最配套另卖。

miRNASelect™ pEGP-mmu-mir-34c Expression Vector.PDF

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22楼
发表于 2011-3-11 18:04 |只看该作者
回复 runsong 的帖子
! o  g0 S' A( M: w: E4 T: f+ u
$ V3 F; _/ W6 A请问你们检测miRNA表达时用的是什么引物,是加poly a还是用颈环引物。但颈环引物有两个系统,不太一样,我发了相关的帖子,不知前辈有何见解。
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23楼
发表于 2011-3-11 18:55 |只看该作者
我是加poly A的,你说的那种方法我没有做过。我倒是建议你可以设计两条引物,都试试。
( W+ z' T) s9 Z9 O; K! F  ~我马上要出去度假了,回来后我们可以讨论讨论 呵呵
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24楼
发表于 2011-5-5 17:13 |只看该作者
pri-miRNA克隆的长度大概在500bp左右,前后各延伸200bp.
& r* D+ z! V/ `) x8 W请教:miRNA表达时用什么载体?较好的都有哪些?我们现在用pSUPER,想换个载体。* a3 D) U; R2 L  K2 g( V
各位前辈不吝赐教。。。
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25楼
发表于 2011-11-10 11:31 |只看该作者
回复 anla0 的帖子8 K) h1 E% |" }/ ~3 i3 y. M- J# g' \& ]

" S+ a* A5 e# M. ]2 ^请问如何找到pri-miRNA的序列呢?这500bp该怎么确定?
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26楼
发表于 2012-10-9 20:29 |只看该作者
楼主,我想问问你的microRNA扩增了多少bp啊,还有你说的加密码子是怎么加法,我不太明白
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27楼
发表于 2012-10-10 13:36 |只看该作者
回复 runsong 的帖子  k/ I' y9 ?9 n) }8 x2 h

- K) Q1 X' O9 p: K9 I楼主,你发的那个microRNA-34的文章我下不了,能麻烦你传一份给我吗  T/ O8 X5 ]  @

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28楼
发表于 2013-5-12 17:35 |只看该作者
我也想构建个
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29楼
发表于 2013-8-2 13:16 |只看该作者
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30楼
发表于 2013-9-18 12:16 |只看该作者
正有用的,学习一下
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