间充质干细胞复苏问题

maxiaona

复苏的步骤应该没问题吧，还是考虑冻存时是否有问题，要不然就是复苏后的培养有问题。
; u* N) E* V/ @. j4 _复苏后有没有变换培养基或培养条件。

shiqingxi

我觉得是你在复苏时候融化成半冰半水后倒入培养瓶时候出的问题。我们都是在37度融化后才离心的 ，因为细胞在跨越冰点的时候伤害最大，你的细胞死亡可能是这个原因。个人观点！

lgh1986

冻存细胞一般2ml管里装1-1.5ml吧，复苏时应该在40度的水域里迅速融化，要全是液体，不能存在冰块，然后转移到15ml管，加培养基至10ml，也就是稀释十倍，然后再离心，这样可以减少冻存液对细胞的伤害，这是我们实验室的常规复苏方法，复苏效果如何还决定于你冻存时细胞的状态，冻存前一天最好更换新鲜培养基，希望对你有帮助。

xuehu20

回复 lgh1986 的帖子% S: S1 A0 O  `& D
, y7 e/ @. e5 v7 x  u
请问你们的常规方法是老师的经验之谈还是有理论依据啊，要是有理论依据的话，请问融化细胞时为什么要全化成液体，转到离心管离心时为什么要稀释10倍，还有冻存前一天为什么要更换培养基啊

lgh1986

冻存细胞遵循一个慢动快溶的原则，不全溶成液体，细胞质内容易产生冰晶，可以致死细胞，稀释10倍是可以稀释DMSO，尽量的减少其对细胞的毒性作用，更换培养基是使细胞状态达到最佳

jinyiran

回复 xuehu20 的帖子' R8 @$ h" F9 l' V8 k

* Z- _0 x; r+ Z给细胞更换培养基是为了细胞的状态比较好，转入到离心管前一般在离心管中加入3-5ml的培养基就可以了，目的是为了稀释DMSO。

joeandanna

细胞死了。而且细胞台盼兰染色剂是有毒性的吧

柏林小杨

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9 ~# U/ y5 N7 b5 e# \: y! l( F4 U
8 P4 B6 {* N6 O" U5 U4 s他用培养基洗了一次，应该DMSO的影响不大了吧？

kingchen81

10%的DMSO，10-20%的血清，DMEM-LG, 冻存
2 Q. J3 E, W, K" _7 A一般短期的话成活率都会在90%以上。
# B9 f: R5 @. t4 I8 ?  @' u复苏的时候，最好用DMEM完全培养基洗涤一次，再种到培养瓶中比较好。

amanda2011

我养的是人脐带间充质干细胞，复苏后也碰到不贴壁的情况，搞不清楚原因