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xuehu20 发表于 2011-1-7 10:30 ' A- v; o# l" \2 O B( ^
间充质干细胞150cm2的瓶中培养,融合度90%时冻存的,冻存液为DMSO:血清=1:9,复苏时在37度水浴锅中融化成半 ...
) x+ f7 ?' ~7 W8 R1.融化的时候要尽快的并且可能的化成水,一般在37度2-3分钟都没问题的,不要半冰半水的,尽量在2分钟中化完冰;$ o; A1 H! m: k/ K
2.化完后倒入的培养基是要预热而不是预冷,本来细胞还是半冰半水,你再给他冷却一下,肯定是要死很多的,因为复苏细胞时首先保证要在37度下迅速升温至37度的;' ?6 |- n9 D: Y) ?8 D( O i8 |5 [
3.冻存时加入了DMSO,复苏时要用5-10倍体积的培养液充分洗涤细胞,在离心沉淀细胞,以充分洗去DMSO,DMSO对细胞有毒害作用;
* g9 s# F: R3 A4.台盼蓝染色只能简单说明情况,并不能真实反映细胞状态,只能作为参考而不是依据;
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