成骨成脂诱导液的配方

yangjie0329

有谁知道成骨成脂诱导液的配方，其中成骨成脂诱导液中地塞米松的浓度分别为多少呀？

tangyvhuang

诱导脂肪实验试剂：$ @0 T8 {' [7 u. |2 `7 O

% l) @  ]% T9 d6 \- T& v8 A+ |$ \. Q" E诱导剂：（DEX  1um/L,消炎痛 200um/L,   IBMX  0.5mM/L,  胰岛素10ug/ml）9 P. G; L) ~5 S! L! w$ c
固定液：10%甲醛
9 J8 B/ M  M$ v, A染色液：油红O 0.5g 溶于100ml异丙醇中。做为储备液室温放置。 临用时取储备液6ml加入4ml蒸馏水中。过滤后并在2小时内使用。3 E9 `3 }6 T+ J- s7 j
! \. {+ D9 p+ X; ?; H" X
操作：1，固定：吸弃培养液后加入固定液5min.7 W# s' ~! {6 ~
      2,吸弃固定液，加入染色液15min后水洗一次镜检观察
2 G# U" S" B* t& r+ }6 @

tangyvhuang

诱导成骨实验试剂：
/ M  e( Y; }; z诱导剂：（DEX  0.1um/L,  β-磷酸甘油 10mM/L,   2-磷酸Vc  50ug/ul,  ）
8 w% @9 ^) B% l' v0 x" }4 H7 O固定液：甲醛：甲醇=1：9混合， 4摄氏度存放。* [1 h9 ~, s) I: j) L# S
0.2M丙二醇 ：丙二醇2.103g加入蒸馏水100ml ，4摄氏度避光存放。
* L7 ?0 i4 ~+ I9 y  B) V5 N, T 0.05M丙二醇：0.2M丙二醇12.5ml+ 0.1N HCL  2.5ml 蒸馏水35ml, 4度避光存放。, k. Q! n% ~- `- n$ \
  基质液：α萘酚磷酸钠 35mg+坚牢蓝RR 35mg 溶于35ml0.05M丙二醇中: r6 R) ^  C8 P0 T$ K7 y

3 P, T% @0 }8 W( i0 T! {操作：1，固定：吸弃培养液后加入固定液30sec 冲洗，晾干。
+ Z. O% `* y) @, ?3 A, P0 |- C& y6 k% Q      2,基质液用NaOH调节PH为9-9.6，过滤
) t) J8 \7 G2 v* X3 Y, f3，染色30min，最好是13摄氏度水浴
* B  e3 k: P6 \* t4 t, n( p4，冲洗晾干
$ T, w* s' f! [. L

yangjie0329

回复 tangyvhuang 的帖子) d  u- F/ P4 ]% V

* M0 T) J: Q# T3 W! a8 }; v- |谢谢

zerollx

回复 tangyvhuang 的帖子+ c: L% J$ A; P# j! u' g

0 Z& U0 Z4 X3 P7 x8 @0 |! u1 k1 l2-磷酸Vc 是 50ug/ul还是50ug/ml？

nannan2ping

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' X% ^* w6 G2 L1 u9 R2 S) i. R8 H0 H9 ]& r  Y# F
应该是50ug/mL吧，也就是50mg/L

ljzmy82

直接到invitrogen 买一瓶成骨分化做得效果跟好，自己配得不是很好用，个人经验！

4445655

成脂诱导培养基主要以DMEM完全培养基为基础并含有10%FBS，1μM /L地塞米松，0.5mM/L IBMX(3-异丁基-1-甲基黄嘌呤),1X ITS(胰岛素铁硒传递蛋白)其中1X ITS可用10μM /L胰岛素，200μM /L吲哚美辛代替。
* A  K* L0 t' x/ V成骨诱导培养基主要以DMEM完全培养基为基础并含有10%FBS，100nM/L地塞米松，50μM/L L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐， 10mM/Lβ-磷酸甘油钠，若无L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐可用50mg/L维生素C代替。
+ {! Z$ M8 R$ G希望对你有用。

liuyul03

关于成骨啊，成脂啊诱导液的配置，文章上就有，而且非常成熟了，也有商品化的在卖。