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小鼠肺微血管内皮细胞养过进来，期待师兄师姐传授教训，我还没开始养，打算按照2005年温医郑加永的《小鼠肺微血管内皮细胞培养及鉴定》做，但是里面“并将肺组织用锋利的手术刀切成1.5x1x1mm大小的组织块, 均匀置于已处理的玻片上（每张玻片15-20块）, 玻片在常温无菌状态下放10min，再将玻片放入已消毒的培养皿（1%明胶预置4度 过夜, 用前2h移入CO2 培养箱, 培养液冲洗）中进行培养, 置培养箱固化2h后。加入含20%新生牛血清、肝素90U/ml、L-谷氨酸胺4mmol/l、青霉素200U/ml和链霉素200ug/ml的RPMI-1640培养基3ml,放入培养箱中培养。60h后将肺组织块取出。继续培养7d, 细胞汇合成单层细胞。肺组织贴瓶后换液,以后每两天换液一次, 每次均换1/2。”
- i; c% H, Q+ e# } O9 v$ M问题：1.已处理的玻片是指仅仅无菌高压吗？
& K. i, F8 Z# b7 G: A) \4 l" ]4 ~$ q 2.玻片放入已消毒的培养皿、60h后将组织块取出（放哪里？）、继续培养7d细胞汇合成单层、肺组织贴瓶后换液（开始还是培养皿，现在变成了瓶，玻片肯定放不进去培养瓶的呀，怎么回事？）
) G( Q9 h: U4 p! }) u: r感谢各位帮助解惑。 |
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发表于 2011-2-22 10:27
