饲养层

zhbshi998

最近在准备饲养层细胞的时候出现了一点问题，想请教各位一下：我在二十四孔板中准备的饲养层细胞，第一天的时候状态还好，可是过一两天有些孔就会有细胞状态特别不好，就是那种细胞将要死亡有萎缩，但是又还没有死亡的那种情况，但是有些孔却很好（孔没有特别的规律），培养方法都是一样的，真不知道为什么？想问一下有谁出现过这样情况的告知一下，谢谢！

张也行

你是不是换成干细胞的培养基了呢？MEF在干细胞培养基生长确实不是非常好，但是不会有问题。" a1 ^4 m1 @# B% o
另外，是同一批处理的吗？用什么方法处理的呢？可能和你处理的时间有关系。& L' r# r0 a& s6 N: U# o. ^
还有就是你铺的明胶还有板子自身的问题了，养干细胞得舍得用好东西啊，呵呵

jefferson

是否重复出现这种情况?
% P% X/ |! D5 U8 o& Y. e+ _) s& r/ M; L- @, [6 M
最好将实验操作过程写出来以便分析.

zhbshi998

谢谢！也不是重复出现这样的情况，偶尔，处理还有一切操作好像每一次都一样啊，再说就是一次处理的结果会出现有的孔好儿有的孔不好，至少一批做的处理及培养条件应该是一样的啊，有人出现过类似的问题吗？1 k+ d* C# p& g- t3 h1 ^$ @" ]* j

jefferson

不知道如何操作的,也没有照片, 不好判断.9 v4 {6 U3 A0 e4 }
, C" G9 p0 ~4 K$ k
估计的一个可能原因, 因为24孔板面积比较小, 因此在接种细胞时, 如果用吸管加细胞悬液, 容易出现细胞密度不均匀的情况, 即有的孔密有的孔刚合适, 那么密的孔细胞容易出现生长情况不佳和较早调亡的情况. 建议接种细胞的时候,用1000ul 的移液器加, 保证各孔的密度均一." C' V, `" t8 \5 M: b) D

7 d. b: ^4 b) e9 N( d- a当然了,如果实际实验中就是这么做的,或者保证了密度的均一,仍出现这种情况,就不好说了. 如果有照片是最好.

f5_105

除了jefferson说的，还有可能有一种情况：传代的母细胞长老了（汇合度超过95%），长成堆的那一部分在处理传代后会消化不散或者消化过度，这种生长状况不好的细胞团所在的孔就会在短时间内凋亡，造成每个孔的细胞情况不一样 。不知你的具体情况，如果没有更换ES培养基的话，这是一种可能的原因。