Hela细胞转染效率低怎么办？

amosummer

本人前两天进行Hela细胞转染，细胞于6孔板，约80%的覆盖度。用的是脂质体lipo2000。转染的是miRNA表达质粒，质粒自带EGFP绿色荧光基因。之前转MCF7细胞能够达到70%左右的转染效率。但这次转Hela细胞发现效率很低，只有3%左右效率，一般一个视野内只能看到4-5个被转细胞。请问有没有哪位高手转过这类细胞，用的什么方法？可以告诉我转染效率低的原因以及如何改善吗？

qdong108

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5 d% f6 O6 N6 Z  o2 L悬浮转染

amosummer

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: O2 A7 u  o5 E能说的具体些吗？

亮亮燕燕

不同的细胞系转染的最佳条件不一样，建议优化一下。还有转染用质粒纯化了吗？我们实验室有质粒不纯化就转染效率低的！

runsong

转染没啥技巧，根据我的经验，我感觉对于转染效率，脂质体质量、细胞种类状态、操作水平各占45%、45%、10%的权重。; \/ F$ Y% u' m5 W
脂质体假货很多，三支中可能只有一支给力。呵呵，买试剂的都是奸商。
5 B& n2 x' G0 b海拉细胞的转染效率正常情况下不会低于60%，你最好先在脂质体质量、细胞状态上找原因。

zuming

hela细胞是比较好转的，你得看看细胞状态，质粒纯度，还有就是楼上说的脂质体是不是有问题。

btyou8u

HeLa是常用的工具细胞，应该是非常好转的，同样的lipo2000，同样的质粒，同样的操作，结果竟然是3%？
( e' u7 \9 B, L% K确定所有试剂，所有步骤没问题，再做一次！！！

张也行

8 j- H0 ^  Y3 N& }0 `$ p5 l# t
+ H5 U3 r! x" g
你的细胞怎么样？脂质体只能转染分裂的细胞，如果你的细胞状态差，分裂速度慢，转染效率会比较低。$ b0 K8 a/ ~2 u' M0 X
可以用同样的质粒转其他好转的细胞，比如293细胞，看看是不是你的质粒，转染试剂有问题。
& P) ]$ m( O3 q$ f- o# {还有下次做的时候最好有一个阳性对照，不然像你这样出现了问题也不知道为什么。Good Luck！

做个好孩子

“Lipofectin2000转染Hela细胞的转染效率才3％”，这个太低了，听我们隔壁实验室的同学说他们用RFect ,siRNA转染的Hela细胞，转染效率有80％左右的，会不会是你们转染前的细胞状态不好？